Yetişkin Zebra Balığı Elektrofizyolojisi: İn Vivo Nöronların Hücre Dışı Elektriksel Aktivitesini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Johnston, L., et al. Bozulmamış Yetişkin Zebra Balığının Beyninde Elektrofizyolojik Kayıt. J. Vis. Uzm. (2013)

Protokol, yetişkin zebra balıklarında elektrofizyoloji gerçekleştirme prosedürünü açıklar. Bu yöntem, in vivo olarak nöral aktiviteyi ölçmek için kullanılabilir.

Protokol

1. Elektrofizyoloji

1. Entübasyon durdurma musluğunu kapatın ve entübasyon tabanını trikat damlasına bağlayan Luer kilidini hızlı bir şekilde ayırın.
   1. Sağlam entübasyon kurulumunu elektrofizyoloji mikroskobuna taşıyın ve perfüzyon sistemine bağlayın.
   2. Trikatini yıkamak için habitat suyunu açın ve ~ 1 saat boyunca 1 ml / dk hızında perfüs yapın.
2. Görsel kontrol altında bir mikromanipülatör kullanarak, ikincil elektrodu, elektrot ucu hayvanın burun deliğine veya üst çenenin arkasındaki çukura yerleştirilebilecek şekilde konumlandırın.
3. Birincil elektrot iğnesini kraniyotomi açıklığına yerleştirin. İğneyi, uç optik tektum içinde oldukça yüzeysel olarak konumlandırılacak şekilde dokuya yerleştirin.
   1. Elektrot çok derinse, elektrik sinyali küçük olabilir.
4. Birincil ve ikincil referans elektrotları arasında kaydedilen elektriksel farkı toplayın ve analiz edin. Bu işlem, hücre dışı kayıtların elde edilmesini sağlayacaktır.
   1. Verileri Boşluksuz modda, 0,1 kHz'lik düşük geçiren filtre ve 1 Hz'lik yüksek geçiren filtre ile 5 kHz örnekleme hızında toplayın.
   2. Habitat suyu en az 45 dakika boyunca perfüze olana kadar elektrofizyolojik aktiviteyi kaydetmeye başlamayın.
   3. Deneysel ilaçların eklenmesinden önce en az 15 dakika boyunca bir doğal aktivite temeli kaydedin. Tercih edilen deneysel ilaçlarla perfüzyona başlayın ve istenen süre boyunca kaydedin. Sağlıklı preparatlarda 2-3 saat boyunca nörolojik aktiviteyi kaydetmek mümkündür.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Habitat suyu			pH 7.0-7.4, iletkenlik 400-450 μS; Instant Ocean ve tarafından sürdürülmektedir Sodyum Bikarbonat
% 0.4 Tris Tamponlu Trikain	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7.2-7.4; -20 oC'de saklanır
60 ml Luer kilitli şırınga tüpleri	Becton, Dickinson ve Şirketi	309653
Luer bağlantılı 3 Musluklar
0.010 inç Gümüş tel	A-M Sistemleri A.Ş.
Q serisi elektrot tutucu
Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petri kabı	Balıkçı Bilimsel	NC9299146
34 G Eğimli iğne	Dünya Hassas Aletler A.Ş.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Profesyonel	TW31KEM
1/8 inç çapında tüp
1 mm çapında boru
Mikroskop (Leica MZ APO)	Başka bir mikroskop kullanılabilir

Gazetesi Serisi Serisi