İntraperitoneal Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Karın Boşluğuna Çözelti Verme Yöntemi

Abstract

Kaynak: Luukinen, H., et al. Mycobacterium marinum Enfekte Yetişkin Zebra Balığında Tüberkülozun Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, Yetişkin Zebra Balığı'nın karın boşluğuna solüsyon iletmek için bir yöntem olan intraperitoneal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

Protocol

1. İntraperitoneal Enjeksiyon ile Deneysel M. marinum Enfeksiyonu

1. Seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 μL'lik bir damlasını bir parça parafilm filmi üzerine pipetleyin ve damlayı 30 G'lık bir insülin iğnesine çekin.
2. Deney için 5-8 aylık vahşi tip balık ve rag1−/\hu1999 mutant balığı kullanın. Yetişkin zebra balığını tank suyunda %0.02 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0) ile uyuşturun. Balığın ventral tarafı yukarı bakacak şekilde nemli köpüklü bir plastik üzerinde bir yarık oluşturacak şekilde yerleştirin.
   NOT: Rag-/- mutant balıklar somatik rekombinasyona giremez ve fonksiyonel T ve B hücreleri üretemezler.
3. İğneyi pelvik yüzgeçler arasına yaklaşık 45°'lik bir açıyla enjekte edin. Tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğunu gözlemlemek için iğne açıklığını yukarı doğru tutun. Bakteriyel süspansiyonu yavaşça enjekte edin ve iğneyi dikkatlice çıkarın.
   not: Enjeksiyon sırasında kırmızı izleyicinin balıktan sızması durumunda, balığı deneyden çıkarın.
4. Enjeksiyondan hemen sonra, balığı taze tank suyu ile bir geri kazanım tankına aktarın.
5. Kullanılan bakteri alikotundan her 15 dakikada bir 7H10 plakalarında bakteri süspansiyonu örneklerini alın ve bakterileri 5 gün boyunca 29 ° C'de inkübe edin ve plakalardaki kolonileri sayarak enfeksiyon dozunu doğrulayın.
6. Balığın sağlığını düzenli olarak kontrol edin ve enfeksiyon belirtileri olan balıkları %0,02'nin üzerinde 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0) konsantrasyonuyla ötenazi yapın.
   not: 34 ± 15 CFU ile enfekte olmuş yetişkin zebra balıklarının yaklaşık %7'si ve 2029 ± 709 CFU ile enfekte olmuş zebra balıklarının %30'u 8 haftaya kadar semptomlara sahip olacaktır. Semptomlar anormal yüzme, dokunmaya tepki eksikliği, nefes nefese kalma, ödem veya gözlemlenebilir israfı içerebilir.
7. Zebra balığının bakımını ortak standartlara göre yapın.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mikobakteri marinum	Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu	ATCC 927
Fenol kırmızısı	Sigma-Aldrich	P3532 Serisi
Fosfat tamponlu salin tabletler (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50SEKME
Middlebrock 7H10 agar	BD, Thermo Fisher Bilimsel	11799042
3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0)	Sigma-Aldrich	A5040
Omnican 100 30 G insülin iğnesi	Braun	9151133
1 mL şırınga	Henke Sass Kurt	4010.200V0