1. İntraperitoneal Enjeksiyon ile Deneysel M. marinum Enfeksiyonu
<ol>
	<li>Seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 μL'lik bir damlasını bir parça parafilm filmi üzerine pipetleyin ve damlayı 30 G'lık bir insülin iğnesine çekin.</li>
	<li>Deney için 5-8 aylık vahşi tip balık ve rag1−/\hu1999 mutant balığı kullanın. Yetişkin zebra balığını tank suyunda %0.02 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0) ile uyuşturun. Balığın ventral tarafı yukarı bakacak şekilde nemli köpüklü bir plastik üzerinde bir yarık oluşturacak şekilde yerleştirin. 
	NOT: Rag-/- mutant balıklar somatik rekombinasyona giremez ve fonksiyonel T ve B hücreleri üretemezler.</li>
	<li>İğneyi pelvik yüzgeçler arasına yaklaşık 45°'lik bir açıyla enjekte edin. Tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğunu gözlemlemek için iğne açıklığını yukarı doğru tutun. Bakteriyel süspansiyonu yavaşça enjekte edin ve iğneyi dikkatlice çıkarın. 
	not: Enjeksiyon sırasında kırmızı izleyicinin balıktan sızması durumunda, balığı deneyden çıkarın.</li>
	<li>Enjeksiyondan hemen sonra, balığı taze tank suyu ile bir geri kazanım tankına aktarın.</li>
	<li>Kullanılan bakteri alikotundan her 15 dakikada bir 7H10 plakalarında bakteri süspansiyonu örneklerini alın ve bakterileri 5 gün boyunca 29 ° C'de inkübe edin ve plakalardaki kolonileri sayarak enfeksiyon dozunu doğrulayın.</li>
	<li>Balığın sağlığını düzenli olarak kontrol edin ve enfeksiyon belirtileri olan balıkları %0,02'nin üzerinde 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0) konsantrasyonuyla ötenazi yapın. 
	not: 34 ± 15 CFU ile enfekte olmuş yetişkin zebra balıklarının yaklaşık %7'si ve 2029 ± 709 CFU ile enfekte olmuş zebra balıklarının %30'u 8 haftaya kadar semptomlara sahip olacaktır. Semptomlar anormal yüzme, dokunmaya tepki eksikliği, nefes nefese kalma, ödem veya gözlemlenebilir israfı içerebilir.</li>
	<li>Zebra balığının bakımını ortak standartlara göre yapın.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="her zaman">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mikobakteri marinum </td>
			<td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu </td>
			<td>ATCC 927</td> Serisi
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenol kırmızısı</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td> Gazetesi
			<td>P3532 Serisi</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fosfat tamponlu salin tabletler (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td> Gazetesi
			<td>P4417-50SEKME</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Middlebrock 7H10 agar</td>
			<td>BD, Thermo Fisher Bilimsel</td>
			<td>11799042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td> Gazetesi
			<td>A5040</td> Serisi
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican 100 30 G insülin iğnesi</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9151133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL şırınga</td>
			<td>Henke Sass Kurt</td>
			<td>4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

İntraperitoneal enjeksiyon: yetişkin bir zebra balığının karın boşluğuna Çözelti verme yöntemi

Kaynak: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Mycobacterium marinum Enfekte Yetişkin Zebra Balığında Tüberkülozun Modellenmesi</a>. J. Vis. Uzm. (2018).
Bu videoda, Yetişkin Zebra Balığı'nın karın boşluğuna solüsyon iletmek için bir yöntem olan intraperitoneal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

İntraperitoneal Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Karın Boşluğuna Çözelti Verme Yöntemi

Kaynak: Luukinen, H., et al. Mycobacterium marinum Enfekte Yetişkin Zebra Balığında Tüberkülozun Modellenmesi.  J. Vis. Uzm. (2018).
Bu videoda bir ...

- Gastrointestinal sistemi boşaltmak ve karın bölgesinde ek alan yaratmak için enjeksiyondan önce yetişkin bir balığı 24 saat oruç tutun. İşlem gününde, balığı tricaine ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir sünger içindeki bir yuvaya yerleştirin.
Daha sonra, istenen miktarda enjeksiyon solüsyonunu bir laboratuvar filmi parçasına pipetleyin ve bir insülin iğnesine çekin. İğneyi ön-arka gövde ekseninden 45 derecelik bir açıyla pelvik yüzgeçler arasına yerleştirin ve yavaşça orta hatta itin. İğneyi karın boşluğuna, karın duvarı ile iç organlar arasındaki boşluğa yaklaşık 1 ila 2 milimetre ilerletin ve ilgilenilen çözeltiyi yavaşça enjekte edin. Herhangi bir dökülmeyi önlemek için iğneyi çıkarmadan önce beş saniye bekleyin. Şimdi, iğneyi dikkatlice çıkarın.
Enjeksiyondan sonra, balığı hızlı bir şekilde taze tank suyu içeren bir geri kazanım tankına aktarın. Balık hemen yüzmeye başlamazsa, anesteziden kurtulmasına yardımcı olmak için suyu solungaçların yakınında döndürün. Örnek protokolde, enfeksiyonu incelemek için RAG1 mutant balığına bir mycobacterium marinum solüsyonu enjekte edeceğiz.
- İlk olarak, seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 mikrolitrelik damlacığını bir parça parafin filmi üzerine sıkın. Ardından, damlacığı 30 gauge insülin iğnesine çekin. Bu deney için beş ila sekiz aylık bir balık kullanın, biri vahşi tip bir balık ve diğeri bir RAG mutant balığıdır.
Bu balıkları ventral tarafı yukarı bakacak şekilde nemli köpüklü bir plastik parçasının yarıklarına yerleştirin. İnsülin iğnesini pelvik yüzgeçler arasına 45 derecelik bir açıyla enjekte edin. Tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğundan emin olmak için iğne açıklığını yukarı doğru tutun. Ardından, bakteri çözeltisini yavaşça enjekte edin. Bundan sonra, iğneyi dikkatlice çıkarın ve balığı hemen taze tank suyuyla dolu bir geri kazanım tankına aktarın.
7H10 plakalarında her 15 dakikada bir kullanılan bakteri alikotundan örnekler alın. Enfeksiyon dozunu doğrulamak için bu örnekleri beş gün boyunca 29 santigrat derecede inkübe edin. Balığın sağlığını düzenli olarak kontrol edin, enfeksiyon semptomları olan balıkları %0,02'den fazla 3-aminobenzoik asit etil ester içeren suda kuluçkaya yatırarak ötenazi yaptığınızdan emin olun.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biyoloji

Danio rerio (zebrafish)

Danio rerio (zebra balığı)

Adult

Yetişkin

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

8.7K Görüntüleme. - Gastrointestinal sistemi boşaltmak ve karın bölgesinde ek alan yaratmak için enjeksiyondan önce yetişkin bir balığı 24 saat oruç tutun. İşlem gününde, balığı tricaine ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir sünger içindeki bir yuvaya yerleştirin. Daha sonra, istenen miktarda enjeksiyon solüsyonunu bir laboratuvar filmi parçasına pipetleyin ve bir insülin iğnesine çekin. İğneyi ön-arka gövde ekseninden 45 derecelik bir açıy...

İntraperitoneal Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Karın Boşluğuna Çözelti Verme Yöntemi

Bu makalede

Özet

Protokol

Malzemeler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler

Ad	Şirket	Katalog numarası
Mikobakteri marinum	Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu	ATCC 927
Fenol kırmızısı	Sigma-Aldrich	P3532 Serisi
Fosfat tamponlu salin tabletler (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50SEKME
Middlebrock 7H10 agar	BD, Thermo Fisher Bilimsel	11799042
3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0)	Sigma-Aldrich	A5040
Omnican 100 30 G insülin iğnesi	Braun	9151133
1 mL şırınga	Henke Sass Kurt	4010.200V0