Zebra Balığı Hasta Kaynaklı Ksenogreft (zPDX): Bir Kanser Modeli

Özet

Kaynak: Wang L. ve diğerleri, Karşılaştırmalı İlaç Değerlendirmesi için Zebra Balığı Larvalarını Konakçı Olarak Kullanan Pankreas Kanserinin Hasta Kaynaklı Heterojen Ksenogreft Modeli. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, zebra balığı hastasından türetilmiş bir ksenogreft modeli oluşturma tekniği açıklanmaktadır. Örnek protokolünde, Gemsitabin ve Navitoclax ilaçlarının pankreas tümörü ksenogreft modeli üzerindeki etkinliğini değerlendiriyoruz.

Protokol

1. Zebra Balığına Karışık Hücreli Süspansiyon Enjekte Etmek

1. Zebra balığı larvalarını uyuşturmak için E3 suyuna 10x tricaine solüsyonu ekleyin ve larvaları (adım 2.3'ten itibaren) modifiye E3 (1 g/L glikoz ve 5 mmol/L L-glutamin ile E3) ile doldurulmuş enjeksiyon plakasına aktarın.
2. 25 μL karışık hücre süspansiyonunu mikro kılcal iğneye doldurun ve iğneyi mikro enjeksiyon manipülatörüne yerleştirin.
3. Enjeksiyon basıncını ve süresini ayarlayın. 48 hpf zebra balığının yumurta sarısı kesesine 50-80 hücre (~ 8 nL) enjekte edin.

2. Ksenogreftli Zebra Balığı Kültürü (zPDX Modeli)

1. Ksenogreft sonrası zebra balığı larvalarını 32 °C'de 40 mL karışım çözeltisine (1 g/L glikoz ve 5 mmol/L L-glutamin içeren E3 çözeltisi) aktarın.

>3. Ksenogreftli Zebra Balığında İlaç Uygulaması ve Tümör Hücrelerinin/Fibroblastların Canlılıklarının Değerlendirilmesi

1. Optimal gemsitabin / navitoklax konsantrasyonunun belirlenmesi.
   1. 12 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 48 hpf'de 10 vahşi tip zebra balığı embriyosu yerleştirin.
   2. Her oyuğa farklı konsantrasyonlarda gemsitabin veya navitoklax ekleyin ve iki gün boyunca 32 ° C'de inkübe edin.
   3. 2 gün sonra, zebra balığı larvalarının önemli malformasyon ve anormal davranış göstermediği ve çalışma konsantrasyonlarının MTD'nin altına ayarlandığı gemsitabin ve navitoklaksın maksimum tolerans dozajını (MTD) hesaplayın.
2. zPDX modellerinin gemsitabin/navitoklax ile tedavisi.
   1. 12 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 10 ksenogreftli larva yerleştirin.
   2. Larvaları dört gruba ayırın, kontrol grubunu %0.1 DMSO içeren E3'te tedavi edin ve diğer grupları 5 μg/mL gemsitabin ve/veya 50 μM navitoklaks ile tedavi edin ve 32 ° C'de iki gün inkübe edin.
3. zPDX modellerinde hücre canlılıklarının ve hücresel bileşimin değerlendirilmesi.
   1. İşlem sonrası ksenogreftli larvaları uyuşturun ve %3 metilselüloz içine yerleştirin.
   2. Bir floresan mikroskobu veya konfokal mikroskop kullanarak larvaları yanal görünümden koruyun.
   3. ImageJ ve GraphPad yazılımını kullanarak kırmızı ve yeşil floresan sinyallerinin yoğunluğunu ölçün.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
L-glutamin	GIBCO Bilişim Teknolojileri	21051024
Gemsitabin	Gemzan Belediyesi
Metilselüloz	Sigma	M0262
Navitoclax (ABT-263)	Selleck Belediyesi	S1001 Serisi	Bcl-xL inhibitörü
ekipman
Mikro enjektör	NARISHIGE
Konfokal Mikroskop	LEICA (LEICA)	SP8 (İngilizce	0,00

Serisi )