Zebra Balığı Kardiyomiyopati Modeli: İlaca Bağlı Kardiyotoksisite

Özet

Kaynak: Ma X., et. al. Yetişkin Zebra Balıklarında Doksorubisin Kaynaklı Kardiyomiyopati Modeli. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, deney grupları arasında minimum varyasyonlarla bir zebra balığı kardiyomiyopati modeli oluşturma tekniği açıklanmaktadır ve örnekte doksorubisin ilacını kullanarak zebra balığı kardiyomiyopati modeli oluşturuyoruz.

Protokol

1. Yetişkin Balıklarda DOX Enjeksiyonu

1. Diseksiyon mikroskobu altında, içinde sünger bulunan 100 mm'lik temiz bir Petri kabı yerleştirin, ardından odağı ayarlayın. Bir balığı tutmak için yaklaşık 4 cm uzunluğunda bir boşluk oluşturmak için süngeri kesin. Daha büyük bir balık için daha uzun bir boşluk yapın.
2. 10 μL'lik bir mikro şırınga ile 34 G'lik bir iğne hazırlayın. Şırınga ve hortumdaki kabarcıkları ve blokları çıkarmak için iğneyi 1x HBSS tamponu ile durulayın.
3. Yetişkin balıkları 0.16 mg / mL tricaine içeren embriyo suyunda 2 dk.
   süreyle uyuşturun NOT: 5 dakikadan uzun süreli anestezi ve ardından DOX enjeksiyonu kolayca balık ölümüne neden olabilir.
4. Süngeri trikadlı embriyo suyuna batırın ve balığı enjeksiyon için süngerin üzerine aktarın.
5. Aşağıda açıklanan iki yöntemden biriyle IP DOX enjeksiyonu gerçekleştirin.
   1. Klasik IP enjeksiyonu
      1. Balıkları karnı yukarı bakacak şekilde süngerin boşluğuna yerleştirin. İğneyi, balık gövdesine 45°'lik bir açıyla pelvik yüzgeçler arasındaki orta hatta hızlı bir şekilde yerleştirin ve yaklaşık 1-2 mm nüfuz edin. Tüm DOX çözümünü yavaşça serbest bırakın. İğneyi çekmeden önce 5 saniye bekleyin. Balık karnında görünür bir kırmızı renkle DOX teslimatını kontrol edin.
   2. Alternatif IP enjeksiyonu
      1. Balıkları, ön tarafı sağa bakacak şekilde süngerin üzerine yanal olarak yerleştirin. Sol elinizle künt uçlu bir forseps kullanarak balığı nazikçe sabitleyin ve mikro şırıngayı sağ elinizle tutun.
      2. İğneyi, eğim yukarı bakacak şekilde pelvik yüzgecin üzerindeki yan çizginin altına yerleştirin. 45°'lik bir açıyla saat 7 konumunu işaret ederek, iğneyi pelvik ve anal yüzgeçler arasında bulunan balık boşluğuna 3-4 mm sokun ve ardından pistonu yavaşça bastırın. Balık karnında görünür bir kırmızı renkle DOX teslimatını kontrol edin.
6. Balığın iyileşmesini sağlamak için enjekte edilen balığı hızlı bir şekilde taze sistem suyuyla dolu temiz bir geçiş tankına aktarın. Enjeksiyonlar arasında iğneyi 1x HBSS tamponu ile bir kez durulayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Geçiş tankı	Su ürünleri yetiştiriciliği	ZHCT100	Balık yetiştiriciliği
Doksorubisin hidroklorür	Sigma	D1515-10MG
Hank'in dengeli tuz çözeltisi (HBBS)	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	14025076	DOX için araç
100 mm petri kabı	doğan	431741
10 μL NanoFil mikro şırınga	TEFE	NANOFIL DOSYASI	Enjeksiyon için
34 gauge iğne	TEFE	NF34BV-2	Enjeksiyon için
Trikain	Argent		Anestezi yapan balıklar

Serisi