zPDX-İnvazivlik Analizi: Zebra Balığı Embriyo Ksenogreftlerinde Metastatik Kanser Hücrelerinin İnvaziv Davranışının Araştırılması

Özet

Kaynak: Ren, J. et al. Embriyonik Zebra Balıklarında İnsan Meme Kanseri Hücrelerinin İnvaziv Davranışı. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu videoda, transgenik zebra balığı embriyolarının perivitellin boşluğuna meme kanseri hücresi verilmesi için bir mikroenjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır. Kuluçkadan sonra, kanser hücresi istilasını, yayılmasını ve metastazı gözlemlemek için embriyoyu floresan mikroskop altında görselleştiriyoruz.

Protokol

1. Metastatik Süreci Görüntüleme ve Analiz Etme

1. Geniş uçlu bir Pasteur pipeti ile anestezi uygulanmış birkaç embriyoyu toplayın ve bunları bir polistiren kabın cam tabanına aktarın.
2. Fazla suyu alın ve sınırlı miktarda yumurta suyu bulundurun. Embriyoyu bir saç halkası aletiyle yerine manipüle edin ve camın üzerine bir kapak yerleştirin.
3. Suya daldırma veya uzun mesafeli kuru objektiflerle birlikte ters çevrilmiş bir konfokal mikroskop kullanın. Embriyoyu, ilgilenilen bölge hedefe mümkün olduğunca yakın olacak şekilde konumlandırın.
4. Sıvı buharlaşmasına bağlı ölüm riskini azaltmak için anesteziden hemen sonra gör....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Geniş uçlu Pastör pipeti (0,5-20 μL)	Eppendorf Belediyesi	F276456I
Konfokal mikroskop	Leica Belediyesi	SP5 STED
Stereo mikroskop	Leica Belediyesi	MZ16FA
Tg (fli:EGFP) zebra balığı türü			Nazikçe Dr. Ewa SnaarJagalska (Biyoloji Enstitüsü, Leiden Üniversitesi, Leiden, Hollanda) tarafından sağlanmıştır.
Cam tabanlı polistiren tabak	WillCo (WillCo)	GWST-5040
Floresan stereo mikroskop	Leica Belediyesi	M165 FC
Trikain (3-aminobenzoik asit)	Sigma Aldrich	A-5040

Serisi Serisi Serisi Serisi