Tavşan İntraduktal Enjeksiyonu: İlgilenilen Çözeltinin Tavşan Meme Bezine Lokalize Verilmesi

1. Ameliyat Öncesi Hazırlık

1. Her tavşanın vücut ağırlığını kaydedin. Tüm klinik öncesi çalışmalarda olduğu gibi, potansiyel toksisiteyi değerlendirmek için hayvan ağırlıklarını düzenli olarak izleyin.
2. Tavşanı uyuşturmadan önce, 50 mL'lik bir konik tüpü piyasada bulunan ultrason jeli ile doldurun ve 30 saniye boyunca 500 x g'da döndürün; santrifüjleme tamamlandıktan sonra jelde görünür kabarcıklar olmamalıdır.
3. Glikopirrolatı 0.1 mg / kg'lık bir dozda deri altından ve asepromazini kas içi olarak 0.75 mg / kg'lık bir dozda uygulayın. Yaşamsal belirtileri ve davranışları izlerken sakinleştiricinin etkili olması için 15-20 dakika bekleyin.
   not: Glikopirrolat, bradikardiyi önleyen ve solunum ve GI sekresyonlarını azaltan anti-kolinerjik bir ajandır. Asepromazin, anestezi için prezervkasyon görevi gören bir yatıştırıcıdır.
4. Anestezik olarak deri altından 35 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin uygulayın. Bununla birlikte, operatör daha deneyimli hale geldikçe ve intraductal uygulamayı daha hızlı gerçekleştirebildiğinden, ilaç dozajlarını deri altından 15 mg / kg ketamin ve 3 mg / kg ksilazine düşürün; Bu, anestezi süresini ve hayvanın anesteziden kurtulması için gereken süreyi kısaltacaktır.
5. Her 15 dakikada bir kalp atış hızını, SPO_2'yi, sıcaklığı, solunum hızını ve mukus zarı rengini kontrol edin ve belgeleyin. Her iki göze de göz kayganlaştırıcı sürün.
   not: Yalnızca uygun eğitim almış ve kurumlarının IACUC'u tarafından onaylanmış personel anestezi uygulamalı veya izlemelidir. Veteriner anestezi monitörünün kullanılması yaşamsal belirtilerin elde edilmesine yardımcı olabilir ve tavsiye edilir. Bununla birlikte, veteriner anestezi monitörü, hayvanı her 15 dakikada bir manuel olarak kontrol etme ihtiyacının yerini almaz. Veteriner monitörünün doğru kullanımı için üreticinin talimatlarına bakın.
6. Anestezinin başlangıcını hafif bir ayak parmağı tutamıyla doğrulayın; devam etmeden önce tavşan yanıt vermemelidir.
7. Tavşanın kaudal karnını, üçüncü ve dördüncü kasık emzik çiftlerinin etrafındaki alanda dikkatlice tıraş edin.
8. Tüylerin çoğu alındıktan sonra, traş edilen bölgeye reçetesiz satılan bir tüy dökücü krem uygulayın. Uygulamadan 10 dakika sonra ılık su ile ıslatılmış nemli kağıt havlu kullanarak kremayı çıkarın.
   not: Tavşan derisi çok kırılgan/hassastır. Tüy dökücü krem 10 dakikadan fazla kullanılmamalıdır. Aslında, 5 dakikada bir "test noktası" denemek ve yalnızca test noktası daha uzun bir süreye ihtiyaç duyulduğunu gösteriyorsa daha uzun süre bırakmak daha güvenlidir.
9. Enjeksiyon bölgesini temizlemek için alanı alkole batırılmış gazlı bezle silin.
10. Tavşanı, devridaim yapan ılık su battaniyesi ve emici bir ped ile kaplı v şeklinde bir oluğa sırtına yerleştirin.

2. Kontrast Maddenin Hazırlanması

1. Hedeflenmemiş kontrast reaktifini üreticinin talimatlarına göre sulandırın. Karıştırmak için hafifçe yukarı ve aşağı pipetleyin.
   not: Bu protokolde kullanılan kontrast madde, sulandırıldıktan sonra oda sıcaklığında 4-6 saat stabildir. Her alım arasında şişeyi nazikçe sallayın.
   NOT: Gerekli çözelti hacmi, enjekte edilecek kanal sayısına bağlı olacaktır. Tavşanın meme başı başına 4 kanal açıklığı vardır ve yetişkin bir Yeni Zelanda Beyaz Tavşanı'nın (Oryctolaguscuniculus) bir duktal ağacını doldurmak için 0.2 mL çözelti yeterlidir. Böylece, bir meme bezine toplam 0.8 mL'lik bir hacim verilebilir.

3. İntraduktal Teslimat

1. Enjekte edilecek uygun emzikleri bulun; 3. ve 4. kasık meme başları çiftleri önerilir, çünkü hayvan sırtı üzerinde konumlandırıldığında kolayca görselleştirilebilirler.
2. 22 G iğne ile 1 mL Luer kilitli tüberkülin şırıngasına 0,2 mL steril% 0,9 salin yükleyin. Salin şırıngaya girdikten sonra 22 G iğneyi uygun şekilde atın ve steril 25 gauge bir iğne ile değiştirin. Alanı bir gazlı bez üzerinde% 85 izopropil alkol ile nazikçe silin.
3. İğnenin eğimi yukarıda ve şırınga hayvanın vücuduna paralel olacak şekilde, iğnenin eğimini emziğin yan tarafına yerleştirin ve yavaşça 0.1-0.2 mL salin enjekte edin; bu, kanal açıklıklarının daha iyi görselleştirilmesini sağlayacaktır.
4. 1 mL Luer kilitli tüberkülin şırıngasına 0,2 mL enjeksiyon solüsyonu yükleyin.
5. Emziği başparmağınız ve işaret parmağınızla nazikçe tutun ve intraduktal enjeksiyon için konumlandırmak üzere hafifçe kaldırın; giyilebilir bir oküler büyüteç, duktal açıklıkları görselleştirmeye yardımcı olabilir.
6. Emziğin kaldırılmış pozisyonunu korurken, 25 G künt uçlu bir iğne kullanarak ilgili kanalı dikkatlice kanüle edin.
7. Kanülasyondan sonra, Luer kilitli şırıngayı künt uçlu infüzyon iğnesinin göbeğindeki yerine kilitlenene kadar hafifçe çevirin.
8. Kanal içinde hızla hareket eden sıvının neden olduğu potansiyel hasarı en aza indirmek için emziği kaldırın ve çözeltiyi yavaşça enjekte edin; çözeltiyi enjekte ederken hiçbir zaman direnç olmamalıdır.