$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Tümör Doku Örneklerinin Hazırlanması
- Tümör dokusunu bir kasette% 10 nötr tamponlu formalin (NBF) içinde sabitleyin.
not: Proksimal akciğer tümörlerinden tümör dokusu genellikle bir göğüs hastalıkları uzmanı veya akciğer uzmanı tarafından orta derecede sedasyon altında gerçekleştirilen bronkoskopi ile elde edilir. Periferik lezyonlar ve yaygın akciğer hastalığı için transbronşiyal veya iğne biyopsisi endikedir. Bu işlemler genellikle ameliyathanede veya yoğun bakım ünitesinde yapılır.
- Kaseti parafin.
içine gömün
not: Fiksasyon, diseksiyondan hemen sonra perfüzyon veya daldırma ile sağlanabilir ve tipik olarak 8-10 saat gerektirir. Fiksatif hacim, numune hacminden 15-20 kat daha yüksek olmalıdır. Biyopsi dokusunun 10 saatten fazla sabitlenmesi önerilmez, çünkü aşırı fiksasyon antijenin maskelenmesine neden olabilir. Sabitleme hızı oda sıcaklığında yaklaşık 1 mm/saattir.
- Sabit doku örneğini doku işlemcisinde balmumu ile sızın (bkz. Malzeme Tablosu).
not: Dehidrasyon, %70, %85 ve %90 artan konsantrasyonlarda üç alkol banyosunda gerçekleştirilir. Su son olarak üç son mutlak alkol banyosu ile uzaklaştırılır. Temizleme üç toluen banyosunda ve balmumu sızması sıcak balmumu banyolarında (44-60 °C) gerçekleştirilir.
- Dokuyu erimiş parafin ile doldurulmuş bir kalıbın içine gömün (Malzeme Tablosuna bakınız) ve katılaşmasını bekleyin.
- Parafine gömülü dokuyu bir mikrotom üzerinde 3 μm kalınlığında bölümlere ayırın.
- Parafin şeridini pozitif yüklü bir mikroskop cam lamına aktarın (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Slaytı 37 °C'de 1 saat kurutun.
Not: Antijenitenliği korumak için doku bölümlerini 2–8 °C'de (tercih edilir) veya 25 °C'ye kadar oda sıcaklığında saklayın ve kesitten 15 gün sonra lekeleyin.
2. Sitoloji Örneklerinin Hazırlanması
- Bronşiyal yıkamaları koruyucu bir solüsyonda toplayın (Malzeme Tablosuna bakınız).
not: Bunun için standart bronkoskopi tekniği kullanılır.
- Örnek alınacak bronşların dağılımını lavajlayın. Yıkamayı temiz bir kapta toplayın. Kabı hastanın adı ve soyadı, doğum tarihi ve numune kaynağı ile etiketleyin.
- Bronşiyal yıkamaları 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın ve 2 g DL-Ditiyotreitol tozu ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız), tüpü 30 dakika vorteksleyin ve ardından oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 250 x g'da santrifüjleyin.
- Süpernatanı çıkarın ve 10 mL mukolitik bir çözelti ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Numuneyi orta hızda (seviye 9) 20 dakika çalkalayın ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 250 x g'da santrifüjleyin.
- Süpernatanı çıkarın ve hücre peletini %10 NBF içeren toplama tüplerine koyun.
- Hücre peletine 4 damla hücre bloğu hazırlama reaktifi ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Hücre peletini bir kasete aktarın, %10 NBF'ye sabitleyin ve hücre bloğu hazırlama ve bölümlere ayırma için parafine gömün (bkz. adım 1.1–1.7).