Koloni Oluşumu Deneyi: Antikanser Ajanların Koloni Oluşturan Akciğer Kanseri Hücreleri Üzerindeki Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Lee, J. Y.et al, Antikanser Kumarin OT48'in Biyoaktivitesinin Sferoidler, Koloni Oluşum Testleri ve Zebra Balığı Ksenogreftleri ile Klinik Öncesi Değerlendirmesi.J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, akciğer kanseri hücrelerinin süresiz olarak çoğalma ve bireysel koloniler oluşturma yeteneğini belirlemeye yardımcı olan koloni oluşumu testi açıklanmaktadır. Bir antikanser ajanının koloni oluşturan hücreler üzerindeki etkisini, ortaya çıkan kolonilerin sayısındaki ve/veya boyutundaki değişiklikleri analiz ederek analiz edebiliriz.

Protokol

1. Koloni Oluşumu Deneyleri

1. 37 ° C'de bir CO₂ inkübatöründe 75^cm2'lik bir şişede% 10 FBS (Fetal Sığır Serumu) ve% 1 antibiyotik ile desteklenmiş 15 mL RPMI1640 hücre kültürü ortamında 20.000 hücre / cm 2 konsantrasyonunda A549 hücrelerinin kültürü ve% 5 CO₂.
2. Deney gününde, bir hemositometre kullanarak hücre konsantrasyonunu belirleyin. 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde 7 dakika boyunca 400 x g'da santrifüjleme ile 50.000 hücre toplayın ve hücreleri 1.5 mL tüplerde 100 μL 1x steril PBS (Fosfat Tamponlu Salin) içinde yeniden süspanse edin.
3. 1.1 mL yarı katı metilselüloz bazlı ortamı (M....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
A549	ATCC (Uzay Servisi)	CCL-185	37 C°
dev/dak 1640	Fransa	30096	4 C°
FBS (FBS)	Biyobatı	S1520-500 Serisi	-20 C°
Penisilin-Streptomisin	Fransa	17-602E	-20 C°
Hücre kültürü şişesi T75	Spl	70075	Rt
PBS çözümü	Klon	SH30256.02	Rt
1.5ml tüp	Ekstra gen	Tüp-170-C	Rt
15 ml tüp	Hyundai Mikro	H20015	Rt
12 oyuklu plaka	Spl	30012	Rt
Yöntem Kültü	Kök Hücre teknolojileri	4230	-20 C°
Tiazolil Mavi Tetrazolyum Bromür (MTT tozu)	Sigma	M5622	4 C°
LAS4000	GE Sağlık Teknolojileri		Rt

Serisi Serisi Serisi Serisi