Akciğer İnstilasyonu ve Fiksasyonu: Sabit Akciğer Hacmini Ölçmek için Trakeaya Sıvı Verilmesi ve Akciğerlerin Sabitlenmesi

Özet

Kaynak: Limjunyawong, N. ve diğerleri, Fare Akciğer Kanseri Araştırmalarında Yararlı Damlatma ve Fiksasyon Yöntemleri. J. Vis. Uzm. (2015).

Bu videoda, akciğer damlatma, fiksasyon ve akciğer hacmi ölçümü için soluk borusuna sıvı eklemenin basit ve güvenilir bir yöntemi açıklanmaktadır.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Akciğer Damlatması

1. Entübasyon için kullanmak üzere ticari bir inç uzunluğunda 20 g intravenöz kanül seçin.
2. Şekil 1'de gösterildiği gibi uçta hafif bir eğrilik oluşturmak için kateter ucunu manuel olarak bükün.
3. Fareyi ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (15 mg / kg) enjekte edilen IP karışımı ile uyuşturun ve refleks hareketinin olmaması durumunda anesteziyi doğrulayın. Anesteziden hemen sonra gözlere veteriner merhemi sürün. Anesteziden hemen sonra gözlere veteriner merhemi sürün ve cerrahi sonrası ve damlatma analjezisi için carprofen (5-10 mg / kg SQ) verin.
4. Fareyi eğimli bir platforma sırtüstü yatırın. Şekil 2'de gösterildiği gibi, üzerine dikiş halkaları bantlanmış büyük bir ofis bağlayıcısı mükemmel şekilde çalışır.
5. Boynun ventral kısmını tıraş edin ve boyun bölgesini %70 alkolle temizleyin ve dezenfekte edin. Yeni lateks ve pudra içermeyen eldivenlerle %70 alkol ile dezenfekte edilmiş cerrahi aletler kullanın.
6. Keskin bir makas kullanarak, alt kesici dişin yaklaşık 12 mm altında boyunda küçük bir cerrahi kesi yapın.
7. Bir forseps ile, trakeanın ventral duvarı görünene kadar boyundaki cildi kaudal olarak nazikçe çekin.
8. Dili nazikçe geri çekin ve kanülü, bükülmüş ucu farenin ventral yüzeyine doğru eğik olacak şekilde yerleştirin. 1.4'te olduğu gibi, boyundaki cildi nazikçe çekin ve kanülü trakeaya yerleştirin.
   not: Biraz pratikle, kateter trakeadan aşağı doğru hareket ederken görünür olacaktır. Yemek borusuna girerse, kateterin hareketinin görsel olarak görülmesi mümkün olmayacaktır. Soluk borusunda herhangi bir kesi yapılmaz.
9. Kateter boyundaki trakeada görüldükten sonra, ses tellerini güvenilir bir şekilde geçmek için yaklaşık 5 mm ilerletin, ancak yine de karina'nın çok üzerinde.
10. Jel yüklemeli bir pipet ucu ile kateterden enjekte ederek 50 μl'ye kadar sıvı damıtmaya hazırlanın. Ucu luer göbeğine yerleştirin, ancak enjekte etmeden önce, farenin nefes almasıyla eşzamanlı olarak uçtaki sıvının hareketini gözlemlemek için dikkatlice bakın. Sonra instilatı enjekte edin.
11. 1 ml'lik bir şırınga ile, sıvının akciğerlerin derinliklerine dağılmasına yardımcı olmak için hemen kateter yoluyla akciğerlere 0.6 ml hava şişirin. Kanülü çıkarın.
12. Kanülü çıkarın.
13. VetBond prospektüs talimatlarına göre küçük cerrahi yarayı kapatmak için az miktarda siyanoakrilat yapıştırıcı kullanın. Fareleri ayrı kafeslere yerleştirin ve uyanana ve herhangi bir rahatsızlık belirtisi olmadan normal davranana kadar görsel olarak izleyin.

2. Sabit akciğer hacminin ölçümü

1. Şekil 3'te gösterildiği gibi Arşimet prensibini kullanarak akciğer hacmini ölçün. Sabit akciğeri formaldehitten çıkarın ve kalbi ve diğer akciğer dışı dokuları inceleyin.
2. Akciğerleri tamamen su altında tutmak için kullanılan, önceden yapılmış basit bir ev yapımı tel destek cihazı kullanın.
   not: Bu cihazın hangi terazi kullanılıyorsa onunla uyumlu hale getirilmesi gerekir. Şekil 4'te gösterilen tipik bir cihaz, plastik pipetlerden ve ince (20 G) telden yapılmıştır. Bu sistem, videoda kullanılan terazi ile iyi çalışır, ancak çoğu laboratuvar terazisine kolayca uyarlanabilir.
3. Terazinin üzerine ≈200 ml su içeren bir beher yerleştirin ve destek kafesi suya yerinde olacak şekilde dara alın. Şekil 5'e bakın. Metal kafesi çıkarın; Akciğeri su yüzeyine yerleştirin ve kafes ile su altına bastırın.
4. Ağırlığı teraziye kaydedin. Bu sayı, yer değiştiren su hacmini yansıtır ve bu nedenle akciğer hacminin doğrudan bir ölçüsüdür. Akciğerin veya dikişin veya tel kafesin herhangi bir parçasının beherin yanlarına veya altına temas etmemesine dikkat edin.
5. Doğruluk için bu ölçümü tekrarlayın. Akciğeri sudan çıkarın ve bir doku üzerinde kurulayın. Kafes yerindeyken kabı tekrar daralayın ve akciğer hacim ölçümünü tekrarlayın. Daha sonra iki hacim ölçümünün ortalaması alınmalıdır.
   not: Akciğerler formalin içinde yaklaşık bir haftadan daha uzun süre bırakılırsa, akciğerlerdeki hava sıvı içinde çözülür. Bu olduğunda, akciğer batacaktır, bu nedenle akciğeri su altında tutmak için Şekil 4'teki gibi herhangi bir cihaz kullanmaya gerek yoktur. Böyle bir durumda, hacim, Şekil 3'te gösterildiği gibi, akciğeri tamamen suya batırana kadar sütür iplerinden biri tarafından tutularak ölçülebilir.

Sonuçlar

Şekil 1: İnstilasyon için kullanılan hafif kavisli uçlu intravenöz kateter.

Şekil 2: Entübasyon için fareleri desteklemek için kullanılan eğimli 3 halkalı bağlayıcı. Bu bağlayıcı 3 fareyi tutacak şekilde ayarlanmıştır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Laboratuvar Terazisi	Ohaus Belediyesi	Maceracı Pro Modeli AV 313	1-300 g aralığına sahip olan diğer teraziler kullanılabilir
20 g Luer intravenöz kateter	Insylte Belediyesi		Diğer birkaç olası satıcı, örneğin Jelco Optiva
500 ml laboratuvar şişesi	çeşitli		Diğer birkaç olası satıcı