Floresan Ortotopik Fare Modeli: İn Vivo Tümör İlerlemesini Değerlendirmek için GFP İfade Eden Kanser Hücrelerinin Fareye İmplante Edilmesi

Özet

Kaynak: Moreno, J. A., et al. Pankreas kanserinin floresan ortotopik fare modeli. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, yeşil floresan proteini eksprese eden pankreas kanseri hücrelerinin farenin pankreasına ortotopik olarak implante edilmesi için protokolü göstermektedir. Ortotopik fare modeli, yeni terapötiklerin primer ve metastatik tümörler üzerindeki etkinliğinin araştırılmasına yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve jove veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi İmplantasyon

NOT: Tüm cerrahi malzeme ve aletlerin steril olduğundan emin olun. Her zaman aseptik teknikleri uygulayın.

1. Masanın üzerine bir ısıtma yastığı yerleştirin ve steril bir örtü ile örtün. Anestezi makinesini kurun ve tüm malzemelerin elinizin altında olduğundan emin olun.
2. Hayvanın burnunu anestezi maskesine yerleştirin ve anesteziyi 1 L / dk oksijen ve% 2,5 izofluran olarak ayarlayın.
3. Hayvanın yan tarafını iyotla nazikçe ovalayın ve% 70 etanol ile durulayın. Üç kez tekrarlayın.
4. Arka pençeyi sıkıştırarak hayvanın tamamen uyuşturulduğunu onaylayın. Hayvan tamamen anestezi altına alınır ve herhangi bir yanıt gözlenmezse ameliyata hazırdır. Bununla birlikte, hayvan irkilirse, buharlaştırıcıda yeterli anestezi olduğundan emin olun ve hayvanın tamamen anestezi altına girmesi için daha fazla zaman tanıyın.
5. Yaklaşık 200 μl hücre süspansiyonunu 18 G'lik bir iğne (önceden soğutulmuş) ile 1.0 ml'lik bir TB şırıngaya yükleyin. İğneyi 27 G'lik bir iğne ile değiştirin ve kullanıma hazır olana kadar buza geri dönün.
6. Dalağın genel alanını (karnın sol üst çeyreği) bulun ve forseps kullanarak cildi bu bölgenin üstüne sıkıştırın. Cerrahi makas kullanarak cep oluşturmak için yaklaşık 1.0 cm'lik bir kesi yapın. Benzer şekilde, düz kası dalağın üstüne sıkıştırın ve periton boşluğuna erişmek için kesin.
7. Dalağın kaudal ucunu nazikçe tutun ve vücuttan dışarı çekin. Pankreas dalağa bağlanacaktır. Islak steril bir Q-ucu kullanarak pankreası yayın ve pankreasın kuyruğunu bulun.
8. 50 μl'lik enjeksiyonu pankreasın kuyruğuna verin, iğneyi 10 saniye içeride bırakın ve iğneyi yavaşça pankreastan dışarı döndürün. Başarılı bir implantasyon, herhangi bir sızıntı olmadan yüzeysel bir baloncuk gibi görünecektir.
9. Pankreas ve dalağı periton boşluğuna geri koyun. Önce kası sarın ve ardından cildi ayrı ayrı sarın. Kesi yapmak için 6-0 dikiş veya zımba kullanın. Hayvanda ağrıyı önlemek için, 24 saat boyunca deri altından (SC) (5 mg / kg) ketoprofen uygulayın. Alternatif olarak, 36 saatlik bir süre boyunca her 12 saatte bir buprenorfin sc (0.05 - 0.1 mg / kg) uygulayın.
10. Hayvanı anesteziden kurtarın ve kafesine geri koyun. Ayrıca ağrıyı izleyin. Hayvanlara ameliyat sırasında (hatta önleyici) ameliyat sırasında (hatta öncesinde) ağrı kesici sağlanmalıdır. IACCUC protokolüne göre veya ilgili veteriner veya görevlendiren kişi tarafından reçete edildiği şekilde ağrı yaşayan hayvanlara ek ağrı kesici sağlanmalıdır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Alcare veya Köpüklü Antiseptik El Ovucu	Steris Belediyesi	639680
TB Şırınga 27 G 1/2	Becton Dickinson'ın fotoğrafı.	305620
İzofluran	Blutler Schein	50562
Ketoprofen	Fort Dodge Hayvan Sağlığı
Cerrahi Makas, 5.5" düz mayonez	Henry Schein	22-1600
PANC-1 GFP hücre hattı	Antikanser, Inc
Küçük Hayvan Görüntüleme Sistemi: iBox Scientia	UVP, LLC. Yayla, Kaliforniya.		Canlı hayvanlarda floresan tümörü gözlemlemek için Küçük Hayvan Görüntüleme Sistemi
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
PANC-1 GFP hücre hattı	Antikanser, Inc
DPBS (Dubelcco'nun Fosfat Tamponlu tuzlu suyu)	Termo Ficher Bilim	21300025

arası