Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Manyetik Rezonans Görüntüleme
- Hücre implantasyonundan genellikle 2 ~ 4 hafta sonra tümör boyutu yaklaşık 5-7 mm çapında olduğunda MRG uygulayın. Küçük hayvan görüntülemeye özel bir MR tarayıcı veya küçük hayvan görüntüleme için özel bir bobin ile donatılmış bir klinik MR tarayıcı kullanın.
not: 1H hacimli rezonatör / verici ve bir yüzey bobin alıcısı (30 mm çapında) kombinasyonuna sahip 9.4T küçük hayvan MR tarayıcısı kullandık (Bruker BioSpin Corp., Billerica, MA). Bir yüzey bobini, daha iyi sinyal-gürültü oranı (SNR) sağlar.
- Her bir hayvana ~ 0.1 - 0.2 ml PBS (fosfat tamponlu salin) içinde ~ 0.1 - 0.2 mmol / kg enjekte etmek için gadolinyum bazlı bir MRG kontrast maddesi hazırlayın.
not: Gadoteridol kullandık ve 15 saniye (0.1 ml / sn) boyunca 0.15 ml PBS'de 0.2 mmol / kg enjekte ettik.
- Bir mikro-polietilen tüp hazırlayın (uzunluk: 7,62 mm, iç çap: 0,28 mm, dış çap: 0,64 mm). Tüpün bir ucuna 30 G iğne (12,7 mm uzunluk) ve diğer ucuna 30 G künt uçlu iğne (9,5 mm uzunluk) yerleştirin. MR kontrast madde içeren 1 ml'lik bir şırıngayı künt uçlu iğneye bağlayın ve tüm tüpü MR kontrast maddesi ile doldurmak için şırıngayı yavaşça itin.
- Hazırlık ve görüntüleme boyunca oksijenle (2 L / dak) karıştırılmış ~% 1 - 2 izofluran ile ventilasyon kullanarak hayvanları uyuşturun. Anestezi derinliğini ayak parmağı kıstırma refleksi ile onaylayın. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere veteriner oftalmik merhem sürün. İğne yerleştirmeden önce bir ısı lambası kullanarak kuyruk damarını genişletin. Kelly forseps kullanarak 30 G iğnenin ortasını tutun ve kuyruk damarına yerleştirin. Kuyruğu düz tutmak için hem kuyruğu hem de boruyu bir parça plastik veya karton kağıda (10 mm genişlik x 100 mm uzunluk) bantlayın.
- Görüntüleme sırasında vücut ısısını düzenlemek için hayvanı sırtüstü pozisyonda dolaşan ılık su (veya ılık hava) ile donatılmış bir hayvan yatağına yerleştirin. Yataktaki sıcaklığı 37 °C'ye ayarlayın. Görüntüleme sırasında vücut ısısını izlemek için bir rektal sıcaklık probu yerleştirin.
- Karın bölgesine ortogonal olarak bükülmüş bir plastik tahta uygulayın. Tümörün tahtanın üst ucunun arkasına yerleştirildiğinden emin olun ve ardından tümörün tahta tarafından yakalandığından emin olmak için tahtayı hafifçe (~ 2 mm) aşağı çekin. Tahtayı hayvan yatağına sıkıca bantlayın.
- Görüntüleme sırasında hayvan solunumunu izlemek için göğüs bölgesine bir solunum pedi dönüştürücüsü (SA Instrument, Inc., Stony Brook, NY) bantlayın. Tümör bölgesinin üstüne bir yüzey bobini yerleştirin ve hayvan yatağına sıkıca bantlayın. Tümör bölgesini hacim bobininin merkezine yerleştirmek için hayvan yatağını MR tarayıcıya itin (iç çap: 72 mm).
- Hem alıcı hem de verici için eşleştirme ve ayarlama yapın, ardından şimleme yapın.
- Tümörü bulmak için anatomik bir MR dizisi ile başlayın. Aşağıdaki çekim parametreleriyle eksenel görüntüler elde etmek için T2 ağırlıklı (T2W) bir turbo spin-yankı dizisi kullanın. Tekrarlama süresi (TR)/yankı süresi (TE) = 3.000/34 milisaniye, 128 x 128 matris, 30 x 30 mm görüş alanı, ortalama sayısı = 1, yankı dizisi uzunluğu = 4 ve tüm tümör bölgesini kaplayacak şekilde geçmeli modda 20 bitişik 1 mm kalınlığında dilim (toplam tarama süresi: 1,6 dk).
not: Ortotopik pankreas tümörlerinin lokalizasyonu subkutan tümörlere göre daha zor olduğundan, daha düşük çözünürlüğe sahip konvansiyonel lokalizatör görüntüler kullanışlı olmayabilir.
- T1 haritasını almak için çeşitli çevirme açılarına sahip T1 ağırlıklı (T1W) görüntüler elde edin. Bu amaçla, aşağıdaki parametrelerle bir gradyan yankı çoklu çevirme açısı yaklaşımı kullanın: tekrarlama süresi (TR)/yankı süresi (TE) = 115/3 msn, 128 x 128 matris, 30 x 30 mm görüş alanı, ortalama sayısı = 4, ~5 - 7 bitişik 1 mm kalınlığında dilimler tümör bölgesini kaplamak için geçmeli modda ve 10'luk yedi çevirme açısı, 20, 30, 40, 50, 60 ve 70 (çevirme açısı başına toplam tarama süresi: 1 dakika).
not: Bununla birlikte, çoklu çevirme açısı yaklaşımı yalnızca B1 alan homojenliği yüksek olduğunda etkilidir. Aksi takdirde, T1 haritaları bunun yerine çoklu TR yaklaşımı ile elde edilebilir.
- Gadolinyum bazlı MR kontrast enjeksiyonu öncesi ve sonrası T1W görüntüleri elde edin. T1 eşlemesi için aynı toplama parametrelerini ve geometrisini kullanın, ancak 30'luk sabit çevirme açısıyla. Özellikle kısa bir TR ve düşük dereceli bir çevirme açısı kullanıldığında, k uzayının merkezi elde edildiğinde kararlı durumu sağlamak için doğrusal kodlamayı kullanın. Kontrast enjeksiyonundan önce 5 temel görüntü elde edin. Ardından kontrast enjeksiyonundan sonra 40 görüntü elde edin (toplam tarama süresi: 45 dakika). Kontrast maddeyi sabit bir hızda (0.01 ml / sn) enjekte etmek için bir şırınga pompası kullanın.
- Hayvan solunumunu sürekli olarak izleyin ve solunum hızını dakikada 50 - 100 nefeste tutmak için izofluran konsantrasyonunu ayarlayın. Görüntüleme boyunca hayvan vücut sıcaklığını izleyin.
- DCE-MRG'yi tamamladıktan sonra, iğneyi ve diğer probları çıkarın ve hayvanı kağıt havlularla kaplı boş bir kafese yerleştirin. Alt karın bölgesine yumuşak bir şekilde masaj yapın. Hayvanın iyileşirken ısı gradyanına girip çıkmasına izin vermek için kafes yarıya kadar bir ısı lambasının altına yerleştirilmelidir. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar bir hayvanı gözetimsiz bırakmayın.
