Deneysel Metastaz Fare Modelinin Kurulması: Mikrometastazları Tespit Etmek için PDX Modelinde GFP İfade Eden CRC Organoid Hücrelerinin İmplante Edilmesi

Özet

Kaynak: Okazawa, Y. et al. Hasta Kaynaklı Kolon Tümöründen Kültürlenen GFP Lentivirus ile Transforme Edilen Organoidler Tarafından Üretilen Mikrometastazların Yüksek Hassasiyetli Tespiti. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, immün yetmezliği olan bir farenin dalağına GFP lentivirus ile etiketlenmiş PDX'ten türetilmiş CRC organoidleri tarafından metastaz oluşturma protokolü açıklanmaktadır. Diğer organları kolonize eden kanser mikrometastazları, GFP ekspresyonunu değerlendirmek için bir floresan mikroskobu kullanılarak tespit edilebilir.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. Alıcı Farelerde GFP Etiketli CRC Organoidleri Tarafından Metastaz Oluşumu

1. CRC PDX'lerin deneysel bir metastaz modelini oluşturmak için:
   1. Fare başına 50 μL PBS'de 4 x 10⁴ hücre içeren bir CRC organoid hücre süspansiyonu hazırlayın. Kullanmadan önce süspansiyonu buz üzerinde tutun. Kanser hücrelerini saymak için bir hemositometre kullanın. (Hücre süspansiyonundaki tek hücreler ve çok hücreli kümeler dahil olmak üzere tümör hücrelerinin sayısını sayın).<....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
NOD/Shi-scid IL2Rγ boş (NOG) fareler	Deney Hayvanları Merkez Enstitüsü, Kanagawa, Japonya	6 haftalık erkek fareleri mikropsuz ve spesifik patojen içermeyen koşullar altında yetiştirin
Yara klipsleri 2×10mm	Natsume üretimi, Japonya	#C-21-S	Kullanmadan önce otoklav
Hamilton şırınga iğnesi boyutu: 22 gauge	Tokyo Bilim, Japonya	% 70 alkol ve steril PBS ile dezenfekte edin.
50ml konik tüp	Sumitomo Bakalit	MS-57500
mikrotüp	Eppendorf Belediyesi	#0030120086	Kullanmadan önce otoklav
Hemositometre	Erma	# 03-202-1
%1 veya %5 FCS içeren CRC organoid kültür ortamı			%1 veya %5 FCS, 100 U/ml penisilin, 100 μg/ml streptomisin, 2 ng/ml hEGF ve 10 μM Y27632, bir ROCK inhibitörü olan GlutaMAX™ takviyeli (Gibco # 10565018) DMEM/F-12. 4°C'de saklayın. 1 ay içinde kullanın.
bir Zeiss Axioplan 2 stereo-floresan mikroskobu	Zeiss

Serisi