Murin İleal Rezeksiyon Modeli: Murin Modelinde İleektomi ile İndüklenen Safra Metabolizmasının İncelenmesi

Özet

Kaynak: Zhang, R., et al. Fare bağırsağında ileektomiye bağlı safra aşırı birikimi. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu videoda, bir fare modelinde bağırsak rezeksiyonu için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu teknik, fare bağırsağında ileektominin neden olduğu safra emilim bozukluğu, aşırı birikim ve toksisite hakkında bilgi sağlar.

Protokol

1. İleektomi ve Anastomoz

1. Küçük bir hayvan kuluçka odasında fareleri izofluran (% 2 - 3) ile uyuşturun. Hayvan izofluran üzerindeyken ayak parmağını sıkıştırma tekniğini kullanarak yeterli anesteziyi belirleyin.
2. Epilasyon ürünleri uygulayarak karın kıllarını alın ve anesteziyi sürdürürken cerrahi süngerler kullanarak tüyleri silin. Vücut ısısını 37 °C'de tutmak için fareyi sıcaklık kontrollü küçük bir hayvan cerrahi masasına (Şekil 1A) yerleştirin. Bir yüz maskesi aracılığıyla izofluran (% 1 - 2) ile anesteziyi koruyun. Fare gözlerine oküler merhem uygulayın.
3. Povidon-iyot ve %70 alkol kullanarak cildi temizleyin ve karın bölgesindeki cerrahi bölgeyi steril cerrahi gazlı bez ile örtün (Şekil 1B).
4. Anestezi yürürlüğe girdikten sonra cerrahi bir neşter kullanarak orta hat karın kesisi yapın. Bağırsağı korumak için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın ve karın boşluğunu tamamen açmak ve ortaya çıkarmak için fare karın kasını ekartörlerle çekin (Şekil 1C).
5. Çekumu bulun. Çekumdan başlayarak, bağlı ileumu ve jejunumun bir kısmını dikkatlice karın boşluğundan dışarı çıkarın (Şekil 1D).
   not: Çekum, oruç tuttuktan sonra bile büyük boyutu nedeniyle kolayca tanımlanabilir.
6. Superior mezenterik arterin üst dalını, eksize edilecek ileal segmenti besleyen kanı tıkamak için 7-0 ipek sütür ile bağlayın. İleal renk, ligasyondan sonra pembeden koyu mora değişir. (Şekil 1E - F).
7. Deneyin amacına bağlı olarak, makas kullanarak ileumun %50 veya %90'ını eksize edin ve çıkarın.
   not: Sahte cerrahi için superior mezenterik arter ligasyonunu yapmayın ve ileumu çıkarmayın.
8. Her iki ileal ucun lümenini% 0.9 salin.
   ile yıkayın not: Kalan sağlam ileum, superior mezenterik arterden hala normal bir kan akışı aldığından, işlem sırasında az miktarda kan dışarı atılacaktır. Bu aynı zamanda ileal uçlara kan akışının normal olduğunu ve anastomoz prosedürü sırasında iskemi olmamasını sağladığını gösterir (Şekil 1G).
9. Her iki ileal ucun yanındaki mezenterleri bulun. Mezenterleri hizalayın ve ileal uçları 8-0 kullanarak birbirine dikin sütür (Şekil 1G - H).
10. İleumun doğal bir şekilde anastomoz edilmesini sağlamak için ileumun karşı tarafını dikin (Şekil 1I).
11. İki ileal ucu birbirine iyice birleştirmek için iki orijinal sütür arasında üst ve alt tarafları dikin (Şekil 1J).
12. Üç aşamalı dikiş prosedürünü bitirdikten sonra anastomoz bölgesinden sızıntı olmadığını onaylayın (Şekil 1G-I). Çekum ve ince bağırsağı karın boşluğuna orijinal anatomik konumuna geri getirin. Ameliyat bölgesini künt bir iğne kullanarak ılık% 0.9 tuzlu su ile yıkayın. (Şekil 1K).
13. Karın kas tabakasının kesisini 6-0 dikişle kapatın. Karın derisi insizyonunu forseps kullanarak hizalayın ve optimal yara iyileşmesini kolaylaştırmak için karın derisini dikin (Şekil 1L).

2. Ameliyat Sonrası Bakım

1. Ameliyat sonrası fareleri iyileşme için yoğun bakım ünitesine aktarın. Ameliyat sonrası iyileşmeye gece boyunca devam etmek için onları sıcaklık kontrollü bir ısıtma yastığı üzerinde bir kağıt yatak kafesine koyun. Farelere normal yiyecek ve suya ek olarak yumuşak yiyecekler sağlayın.
2. Analjezi için her 8-12 saatte bir deri altı enjeksiyonu ile buprenorfin (0.05 - 0.1 mg / kg) uygulayın.
   not: Ciddi şekilde hastalanırsa fareleri CO₂ ile ötenazi yapın.
3. Son noktada, aşırı dozda izofluran kullanarak fareleri kurban edin ve gerektiği gibi numuneleri toplayın (bölüm 3).

3. İleektomiye Bağlı Safra Aşırı Birikiminin Değerlendirilmesi

1. İleumun% 0'ı (sahte),% 50'si veya% 90'ının rezeksiyonundan bir gün sonra fareleri tartın ve inceleyin.
2. GI kanalını çıkarın ve tartın. Safra tuzu emilim bozukluğu ve aşırı birikimin şiddetini değerlendirmek için GI ağırlığının vücut ağırlığına oranını hesaplayın.
3. GI kanallarını 15 mL'lik konik tüplere aktarın ve makas kullanarak kısa segmentler halinde kesin. Kestikten sonra 3.000 x g'da 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı (safra tuzları içeren GI sıvısı) temiz bir tüpe aktarın.
4. GI sıvısının toplam hacmini ve ağırlığını ölçün ve GI kanalındaki safra aşırı birikimini daha fazla değerlendirmek için sıvı ağırlığını GI yolu ağırlık oranına hesaplayın.
5. Safra asidi tahlili ile süpernatanttaki toplam safra miktarını belirleyin.

Sonuçlar

Şekil 1: İleektomi Cerrahi İşlemleri. (A) Sıcaklık kontrollü küçük bir hayvan ameliyat masası kullanarak vücut ısısını koruyun. (B) Karın derisi hazırlığından sonra ameliyat bölgesini steril gazlı bezlerle örtün. (C) İnce bağırsağı orta hat abdominal insizyonundan açığa çıkarın. (D) Çekum (beyaz kesikli çizgi ile vurgulanır) ileumu bulmak için işaretlenir. İleumu (sarı kesikli çizgi) ve su...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
C57BL/6J	Jackson Laboratuvarı
Diseksiyon mikroskobu	Olympus	SZ61	Ameliyat için
Hayvan sıcaklık kontrolörü	Physitemp Instruments, Inc	TCAT-2LV	Vücut ısısı kontrolü için
İzofluran anestezik buharlaştırıcı	Veteriner Ekipmanları	911104	Anestezi için
Diseksiyon forseps	Güzel Bilim Araçları A.Ş.	11274-20	Ameliyat için
makas	Güzel Bilim Araçları, Inc	14084-08	Ameliyat için
İğne tutucu	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-7882	Ameliyat için
Mikro bıçaklar-iğne bıçağı	Balıkçı Bilimsel	10318-14	Ameliyat için
6-0 Monofilament Sütür	Etik	1698 G	Karın derisinin kapatılması için
7-0 İpek Sütür	Etik	766G	Ligasyon için
8-0 Monofilament Sütür	Etik	1714 G	Anastomoz için
Cerrahi süngerler	Dynarex A.Ş.	3333	Ameliyat için
Küçük pamuk uçlu aplikatörler	Balıkçı Bilimsel	23-400-118	Ameliyat için
İzofluran	Piramal Sağlık Limited Şirketi	66794-013-25	Anestezi için
Buprenorfin hidroklorür	Reckitt-Benckiser İlaç	12496-0757-1	Analjezi için
% 0.9 sodyum klorür Enjeksiyonu	B. Braun Tıp A.Ş.	0264-7800-10	Yıkama/enjeksiyon için
Povidon iyot hazırlama çözeltisi	Dynarex A.Ş.	1413	Cilt hazırlığı için
Puralube veteriner merhem	Dechra Veterinerlik Ürünleri	17033-211-38	Gözlerin korunması için
Saç çıkarıcı losyon	Kilise ve Dwight Co., Inc.		Cilt hazırlığı için
Yoğun bakım ünitesi	Termo Bakım	FW-1	Ameliyat sonrası iyileşme için
Toplam safra asidi test kiti	Genzim Teşhisi	DZ042A-K01	Safra asidi tahlili için

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi