Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Segmental Adeno-Cre Enfeksiyonu: Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modelleri Kullanılarak İzole Kolorektal Kanser Oluşturma Tekniği

994 görüntülenme

⸱

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Kaynak: Betzler, A. M., et al. Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Tasarlanmış Bir Fare Modeli.J. Vis. Uzm. (2017).

Bu videoda, segmental adeno-cre enfeksiyonu ile kolorektal fare modelinin oluşturulması anlatılmaktadır. Enfekte kolon segmenti, mukozanın bu segmentinde tümörigeneze yol açar ve sonuçta adenomların invaziv ve metastatik karsinoma ilerlemesine neden olur. Bu model, kanser biyolojisi çalışmaları ve klinik öncesi terapötik çalışmalar için çekici bir platformdur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi Adeno-kr Enfeksiyonu Yoluyla Lokal Tümör İndüksiyonu

  1. Hayvanların ameliyata hazırlanması
    not: Hemen hemen herhangi bir koşullu ("floxlu") mutasyon, burada açıklanan yöntemle indüklenebilir. Apc, Kras veya Tp53 gibi kolorektal kanserle ilgili genlerdeki mutasyonların kullanılması önerilir. Cre rekombinasyonunun verimliliği, eksize edilecek yapının boyutuna bağlıdır. Büyük floklu diziler daha az verimli....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1. Kolorektal tümörlerin kolonoskopik görüntüleri (parantez içinde verilen hayvanın koşullu alelleri).
A. Normal distal kolon. B. Adeno-cre enfeksiyonundan 2 hafta sonra erken adenom. Bu faredeki bir GFP muhabir alelinden kaynaklanan yeşil renge dikkat edin. (Apctm2Rak, Krastm4Tyj, Gt(ROSA)26Sortm6(CAG-ZsGreen1)Hze

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Suyu Yaşam Teknolojileri GmbH 14190169
Tripsin-EDTA (% 0.25, FenolRed) Yaşam Teknolojileri GmbH 25200072
Normal tuzlu su% 0.9 (E154) Serumwerk Bernburg AG 10013
Aqua reklam enjektabilia B. Braun Melsungen AG 235144
Ad5CMV-Cre (adenovirüs, c = 2E +11 PFU/mL) Gen Transfer Vektör Çekirdeği Iowa Üniversitesi
15 mL, 50 mL santrifüj tüpleri Greiner Bio-One GmbH188271/227270
Eppendorf tüpleri 1,5 mL/ 2 mL Sarstedt AG & Co. 72.695.400
Petri kabı PS 100/15 mm (steril, Nuclon) Fisher Bilimsel GmbH 10508921/ NUNC150350
1 mL Şırınga (ölü hacim olmadan) - Injekt-F SOLO Braun/neoLab 194291661
30G enjeksiyon iğnesi BECTON DICKINSON304000
Sevofluran (Sevoflurane AbbVie) AbbVie Germany GmbH & Co. KG
Tıbbi oksijen Air Liquide Medical GmbH
Buprenorfin (Temjezik)Bireysel Eu Ltd.
Bepanthen - oftalmik merhem Bayer Hayati GmbH 10047757
Masa Üstü Araştırma Anestezi Makinesi x / O2 Flush w / Sevofluran BuharlaştırıcıPark Alanı Bilimsel V3000PS/PK
Selüloz çubuklar Lohmann & Rauscher Almanya 13356
İnsülin şırınga EMG 1 mL (30G kanül ile)B. Braun Melsungen AG9161627S
İnce Delikli Boru (delik: 0,28 mm / çap: 0,61 mm)Smiths Medical Deutschland 8800/100/100
Mikro Adson ForsepsGüzel Bilim Araçları11018-12
İris Makas - ToughCutGüzel Bilim Araçları14058-11
Olsen-Hegar İğne TutucuGüzel Bilim Araçları12002-12
AutoClip KitiGüzel Bilim Araçları12020-00
PDS Z1012H 6/0 C1 (cerrahi sütür)Johnson & Johnson Medical GmbHZ1012H
Kavisli Mikro Serrefine Vasküler KelepçeGüzel Bilim Araçları18055-05
Fogarty Bahar KlipsleriErtuğrulCDSAFE 6 (İngilizce)
Sıcak Tabak 062Labotect (Labotect13854
Isis - Saç tıraş makinesiAesculap - Braun
Soğuk Işık Fıskiyesi XENON 175Karl Storz ·20132101-1Karl Storz Coloview Sistemi Mainz
Fiber Optik Işık KablosuKarl Storz ·69495NLKarl Storz Coloview Sistemi Mainz
TRICAM Üç Çipli Kamera KafasıKarl Storz ·20221030Karl Storz Coloview Sistemi Mainz
TRICAM SLII Kamera Kontrol ÜnitesiKarl Storz ·20223011-1Karl Storz Coloview Sistemi Mainz
15" Düz Ekran Monitör EndoVueKarl Storz ·9415NNKarl Storz Coloview Sistemi Mainz
HOPKINS Düz İleri Teleskop çap 1.9 mm; uzunluk 10 cm otoklavlanabilir fiber optik ışık iletimi dahilKarl Storz ·64301AA
Koruma ve Muayene KılıfıKarl Storz ·61029C
)

Daha fazla makale keşfet

Kolorektal Kanser Fare ModeliGenetik Olarak Modifiye Edilmiş Fare ModeliCre Rekombinaz EnzimiLoxP İnserleriAdenoviral Süspansiyon EnjeksiyonuKolonoskopik Tümör İzlemiDistal Kolon SegmentasyonuTrypsin-EDTA İşlemiKarın Boşluğunun Açılması