Yöntem makalesi
1.5K görüntüleme
⸱
30 Nisan 2023
Kaynak: Kochall, S., et al. Kolorektal Kanserin Ortotopik Fare Modelinde Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin İzolasyonu. J. Vis. Uzm. (2017).
Bu videoda, ötenazi uygulanmış bir kolorektal tümör fare modelinin tam kan örneğinden dolaşımdaki tümör hücrelerinin izole edilmesi için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır. Bu izole CTC'ler kültürlenebilir ve amaçlanan aşağı akış analizi için kullanılabilir.
Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Tam Kan Örneklerinden Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin İzolasyonu
NOT: Anestezi uygulanmış farelerde transkutanöz kardiyak ponksiyon ve ardından ötenazi ile kan elde edin. İdeal olarak, 1.000 μL kan, 100 μL bir antikoagülan (Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) veya heparin) ile önceden doldurulmuş bir şırıngaya çekilir. CTC'leri tanımlamak için bir anti-insan-EpCAM (epitel hücre adezyon molekülü) antikoru kullanın. Bu, fare modelinde insan epit....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Yoğunluk gradyan ortamı – Ficoll | Kök Hücre - Lenforep | 7801 | |
| Alexa Fluor 488 anti-insan CD326 (EpCAM) Antikor klonu 9C4 | Biyo Efsane | 324210 | |
| Alexa Fluor 488 anti-fare CD326 (EpCAM) Antikor klonu G8.8 | Biyo Efsane | 118210 | |
| Petri Kabı, ø 60 x 15 mm, 21 cm², Havalandırma | Greiner biyo-bir | 628102 | |
| Floresan Hücre Kültürü Mikroskobu | Leica Belediyesi | ||
| Transferman 4r Mikromanipülatör | Eppendorf Belediyesi | ||
| CellTram Hava | Eppendorf Belediyesi | Mikromanipülatöre bağlı aspirasyon pompası | |
| Dmz Üniversal Mikroelektrot Çektirme | Dagan Şirketi | Tek hücreli aspirasyon için mikro kılcal damarların üretimi için gereklidir | |
| Prizma Cam Kılcal Damarlar | Dagan Şirketi | ||
| PAP kalemi | Abcam Belediyesi | ||
| Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Suyu | Yaşam Teknolojileri GmbH | 14190169 | toplama tamponu |
| Fetal Baldır Serumu (FCS) | BIOCHROM AG | S 0115 | toplama tamponu |
| Penisilin/Streptomisin (PenStrep) | Yaşam Teknolojileri GmbH | 15140122 | toplama tamponu |
| Edta | Roth | 8040.1 | toplama tamponu |
| İmmünohistokimya | |||
| Saflaştırılmış anti-insan CD326 (EpCAM) antikor klonu 9C4 | Biyo Efsane | 324201 | EpCAM immünohistokimyası |
| HRP tavşan anti-fare IgG | Abcam Belediyesi | ab97046 | EpCAM immünohistokimyası |
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste