Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Özet

Kaynak: Müller, I. et al. Bir 3D Organotipik Melanom Küresel Cilt Modeli. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Primer Keratinositlerin Epidermisten İzolasyonu

1. Epidermal dokuyu PBS ile yıkayın. Epidermisi daha küçük parçalar halinde (1 mm²) kesin ve 50 mL'lik konik bir tüpte toplayın. 10 mL 1x Tripsin-EDTA (önceden 37 °C'ye ısıtılmış) ekleyin ve 37 °C'de bir su banyosunda 5 dakika inkübe edin. Doku süspansiyonunu her 2 dakikada bir girdaplayın.
2. 1 mL fetal buzağı serumu (FCS) ekleyerek enzimatik re....

Sonuçlar

Şekil 1: 3D organotipik derinin yetiştirilmesi, ortama batırılmış ve hava-sıvı arayüzünde yeniden yapılandırılır. 0. günde, primer keratinositler, bir kollajen tip I matrisine gömülü primer fibroblastlardan oluşan dermal bölmenin üzerine ekilir. 3D cilt rekonstrüksiyonları, 7 gün boyunca EGM ile su altında ekilir, ek duvardan ayrılır ve küçülmeye başlar. 8. günde, ekler 6 kuyucuğa aktarılır ve epiderm.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
fetal serum albümini (FCS)	Thermo Fisher Bilimsel	10270106	Hücre kültürü ortamına% 10 ekleyin
Tripsin-EDTA	Thermo Fisher Bilimsel	25300054	PBS'de 1X seyreltin
DMEM (Ömer Çiçeğ	Thermo Fisher Bilimsel	41965062	primer fibroblastların yetiştirilmesi için
Dağıtma	Gibco yaşam teknolojileri	17105041	2U/ml, PBS'de çözün
Kollajen tip I	BD Biyolojik Bilimler	354249	Genellikle sıçan kuyruğundan elde edilen konsantrasyon 3.5-4 mg / ml olmalıdır
24 oyuklu Nunclon ekler	Nunc (Rahibe)	140629	8 μm gözenek boyutu; asılı değil, ayakta duran ekler kullanın
hücre süzgeci	BD Şahin	352360	sarı
Gentamisin	Thermo Fisher Bilimsel	15750060	PBS'de çözülür
Keralife keratinsiit ortamı	Hücre Sistemleri		FCS veya antibiyotik eklemeyin
Kollajenaz	SERVA	17454	NB4 standart sınıf
Juvenil insan keratinositleri	Hücre Sistemleri	FC-0007	Juvenil sünnet derisinden kendi hazırlığına alternatif
Juvenil insan fibroblastları	Hücre Sistemleri	FC-0001	Juvenil sünnet derisinden kendi hazırlığına alternatif
EGF (Türkçe)	Gibco yaşam teknolojileri	13247-051	sadece EGM besiyeri üretimi için 10 ng/ml ekleyin
Kalsiyum klorür	Merck Kimyasalları	2381	EGM üretimi için 1,9 mM ve MM ortamı için 3,8 mM ekleyin
Selenik asit	Alfa Aesar	18851	EGM ve MM ortamı üretimi için 53 nM ekleyin
Insülin	Lilly	HI0219 Uğultu Kalemi 3ml 100 E.I./ml	EGM ve MM ortamı üretimi için 5 μg/ml ekleyin
Etanolamin	Sigma-Aldrich	E-0135	EGM ve MM ortamı üretimi için 0,1 mM ekleyin
P-Etanolamin	Sigma-Aldrich	P-0503	EGM ve MM ortamı üretimi için 0,1 mM ekleyin
Holo-Transferrin	Sigma-Aldrich	T-0665	EGM ve MM ortamı üretimi için 5 μg/ml ekleyin
Triiyodotironin	Sigma-Aldrich	T-6397	EGM ve MM ortamı üretimi için 20 pM ekleyin
Hidrokortizon	Sigma-Aldrich	H-088816	EGM ve MM ortamının üretilmesi için 0,4 μg/ml ekleyin
Progesteron	Sigma-Aldrich	P-8783 Serisi	sadece EGM ortamının üretilmesi için 10 nM ekleyin
Hepes Belediyesi	Sigma-Aldrich	H-3784	EGM ve MM ortam üretimi için 15 mM ekleyin
Serin	Sigma-Aldrich	S-4311 Serisi	EGM ve MM ortamı üretimi için 1 mM ekleyin
Kolin klorür	Sigma-Aldrich	Cı-7017	EGM ve MM ortamı üretimi için 0,64 mM ekleyin
dFCS (dFCS)	Sigma-Aldrich	F-0392 Parsel 086K0361	EGM ve MM ortamı üretimi için %2 ekleyin
Adenin	Sigma-Aldrich	A-9795	EGM ve MM ortamı üretimi için 0,18 mM ekleyin
L-Glutamin	Promosyon Hücresi	C-42209	EGM ve MM ortam üretimi için 7,25 mM ekleyin
Stronsiyum klorür	Sigma-Aldrich	255521	EGM ve MM ortamı üretimi için 1 mM ekleyin

Serisi Serisi Adet Gazetesi Teslim Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Serisi Gazetesi