Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnsan Derisi Keratinosit İzolasyonu: Deri Örneklerinden Primer Keratinositlerin Kültürlenmesinde Bir Yöntem

4.2K görüntülenme

⸱

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Johansen, C. et al. Yetişkin Derisinden Primer İnsan Keratinositlerinin Üretimi ve Kültürlenmesi. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu videoda, insan derisinin epidermal tabakasının en belirgin hücreleri olan keratinositlerin, enzimatik sindirim ve mekanik bozma yöntemlerinin bir kombinasyonu kullanılarak izolasyonu anlatılmaktadır. Bu yöntem, seçici bir büyüme ortamı kullanarak keratinositlerin diğer cilt hücresi tiplerine göre tercihli büyümesine yardımcı olur.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Keratinositlerin İnsan Derisinden İzolasyonu

  1. Aşağıdaki çözeltileri yaparak başlayın: DPBS'de 50 mL% 0.25 tripsin ve% 0.1 glikoz çözeltisi. Çözeltiyi karıştırın ve filtreleyin (0.2 μm) sterilize edin. 10 mL RPMI-1640 +% 2 FBS çözeltisi, 50 mL DPBS ve keratinosit serumsuz ortam (KSFM) hazırlayın. 500 mL KSFM'ye KSFM takviyeleri ve 250 μL gentamisin ekleyin. Kullanmadan önce çözeltileri 37 °C'ye ısıtın.
  2. <....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
KSFM (Türkçe)ThermoFisher Bilimsel17005-034Hücre kültürü ortamı
KSFM takviyeleriThermoFisher Bilimsel37000-015KSFM için takviyeler
DPBS (DPBS)ThermoFisher Bilimsel14190-144Kalsiyum ve
içermeyen DPBS Magnezyum
DMSO (Türkçe)Sigma-AldrichD8418Dimetil sülfoksit
GentamisinThermoFisher Bilimsel15710-049Hücre kültürü ortamı katkı maddesi
Sterilizasyon filtresiSartorius16534Gözenek boyutu 0,2
olan şırınga filtresi μm
TripsinSigma-AldrichT7409Hücreleri denemek için kullanılır
glikozSigma-AldrichG7528-
dev/dak-1640 dev/dakThermoFisher Bilimsel61870-010-
FBS (FBS)ThermoFisher Bilimsel16000044Tripsini etkisiz hale getirmek için kullanılır
Forseps--Herhangi bir şirketten forseps
olabilir kullanılmış
makas--Herhangi bir şirketten makaslar şunlar olabilir
kullanılmış
neşterSwann Morton ·0501Herhangi bir şirketten neşterler şunlar olabilir
kullanılmış
% 70 etanol---
Gazlı bez pedleriNOBAMED (HAYIRLI)875420Herhangi bir sağlayıcıdan gazlı bez pedleri şunları yapabilir
Kullanılabilir
Ayak planya makinesiCredo Solingen1510Herhangi bir sağlayıcıdan ayak planya
Kullanılabilir
Petri kaplarıTPP (Cesaret Partisi93100Herhangi bir sağlayıcıdan petri kapları şunları yapabilir
Kullanılabilir
Metal filtre--Şirket içi 1 mm delik boyutu metal
filtre
75 cm2 kültür şişesiNUNC (Ulusal Kızılderili156499-
150 cm2 kültür şişesiTtp90151-
% 0.05 Tripsin-EDTA çözeltisiThermoFisher Bilimsel25300-062Hücreleri şu durumlarda tripsize etmek için kullanılır
Geçiş
Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi adet )

Daha fazla makale keşfet

İnsan KeratinositleriEpidermal Doku İzolasyonuEnzimatik SindirimMekanik ParçalamaKeratinosit Büyütme BesiyeriHücre Süspansiyonu FiltrasyonuSantrifüj ile ÇökeltmeTrypan Blue BoyamaKSFM KültürüEpidermal Hücre Süspansiyonu