Melanom Kök Hücre İzolasyonu: Manyetik Aktivasyonlu Hücre Sıralaması Kullanılarak CD133 Pozitif ve Negatif Melanom Hücreleri Elde Etmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Welte, Y. et al. Hasta Kaynaklı Hücre Kültürü ve Melanomdan CD133+ Varsayılan Kanser Kök Hücrelerinin İzolasyonu. J. Vis. Uzm. (2013)

Bu videoda, manyetik olarak aktive edilmiş hücre sıralaması kullanılarak bir primer melanom hücre hattından CD133 negatif ve pozitif melanom kök hücrelerinin izole edilmesi tekniği açıklanmaktadır. CD133 pozitif melanom CSC'leri, melanom tümörigenezisinin mekanizmalarını anlamak için daha fazla incelenmiştir.

Protokol

1. CD133⁺ ve CD133^- Melanom Hücrelerinin LS Sütunları Kullanılarak Manyetik Hücre Sıralaması

1. PBS'de 2 mM EDTA ve% 5 FCS içeren MACS tamponu hazırlayın. 0,22 μm Steritop-GP Filtre Ünitesi kullanarak tamponu ters çevirerek ve steril filtrat yaparak karıştırın. Kullanmadan önce tamponu 4-8 °C'ye soğutun ve gazını alın.
2. Accutase, PBS ve Quantum 263 ortamını 37 °C'ye kadar önceden ısıtın.
3. % 80 birleşik hücreleri PBS ile yıkayın. Uygun miktarda Akutaz ekleyin ve hücreler kültür yüzeyinden ayrılana kadar inkübe edin. Quantum 263 ortamını kullanarak hücreleri 50 mL'lik bir tüpte toplayın.
4. Hücre s....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Aktataz	PAA Laboratuvarları GmbH	L11-007
Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dehidrat (EDTA)	Sigma-Aldrich, Inc.	E-7889
CD133/1 (W6B3C1)	Miltenyi Biotec GmbH	130-092-395
Dolaylı CD133 Mikro Boncuk Kiti insan	Miltenyi Biotec GmbH	130-091-895	İçindekiler: CD133/1(AC133)-Biotin, anti-Biotin Mikro Boncuklar ve FcR Bloke Edici Reaktif
Kuantum 263	PAA Laboratuvarları GmbH	U15-815
MACS Ayırıcı Çoklu Stand	Miltenyi Biotec GmbH	130-042-303
MACS Ayırma Kolonları 25 LS Kolonları	Miltenyi Biotec GmbH	130-042-401
QuadroMACS Ayırıcı	Miltenyi Biotec GmbH	130-090-976

Serisi Serisi Serisi