Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Deney Hayvanları, Reaktifler ve Ekipmanlar
- Yaş ve cinsiyete uygun fareler kullanın. Çalışmaya 7-9 haftalıkken başlayın, çünkü çoğu farede cilt o yaş civarında telojen (dinlenme aşaması) içindedir.
- Çalışma sırasında hayvanların davranışlarını gözlemleyin ve eğer kavga ederlerse, ki bu genellikle erkeklerde olur, onları ayrı ayrı barındırın. Kavgalar ciltte tümör oluşumunu teşvik eden kesiklere neden olabilir. Dişi fareler daha az agresif davranışları nedeniyle tercih edilir. Tipik deney grubu büyüklüğü, grup başına 8-20 hayvan arasında değişir.
not: Daha önceki çalışmalarda görülen biyolojik varyansa dayanan güç hesaplamaları, yeterince büyük bir grup büyüklüğünün seçilmesine yardımcı olur. Bu makalede örnek olarak kullanılan suşlar arasında Balb/c ve C57BL/6 bulunur. Bununla birlikte, SENCAR ve FVB gibi diğer birçok fare türü, DMBA-TPA modeli ve Wistar ve Sprague-Dawley sıçanları ile kullanılmıştır. Çalışmanın başlamasından önce ulusal veya yerel hayvan çalışmaları komitesinden bir lisans alınması gerekmektedir. Genel refah hususlarına ek olarak, modele özgü uç noktalar tipik olarak skuamöz hücreli karsinom (SCC) ve cilt enfeksiyonudur. Aseton içindeki tümörjenik kimyasalları uyguladıktan sonra kaşıntıya bağlı ciltte çizikler tipiktir, ancak aksi takdirde hayvanlar herhangi bir rahatsızlık belirtisi göstermemelidir. Düzenli olarak tartılmak (örneğin, ayda 2 kez) hayvanların refahını değerlendirmeye yardımcı olur.
- Her ikisi de asetonda seyreltilmiş DMBA ve TPA kullanın. DMBA'nın çalışma konsantrasyonu 250 g / L'dir. Bir hayvan için bir doz, 200 μL asetonda 50 μg DMBA'dır. TPA'nın stok konsantrasyonu 125 g / L ve tedavi konsantrasyonu 25 g / L'dir. Bir hayvan için bir TPA dozu, 200 μL asetonda 5 μg'dir.
DİKKAT: DMBA yutulduğunda zararlıdır ve kansere neden olabilir. Aseton hızla buharlaşır ve yanıcıdır. Baş dönmesine neden olabilir ve gözleri tahriş edebilir. Solunum maskesi kullanın ve/veya vakumlu akış altında çalışın. Bu kimyasallardan herhangi birini kullandıktan sonra eldivenleri değiştirin. Ayrı ayrı havalandırılan kafesler, farelerin muhafazası sırasında kimyasalların yayılmasını önler. Uygulamadan sonra, DMBA'yı işlemek için kullanılan pipet uçlarını toplayın ve bunları tehlikeli atık olarak atın.
not: DMBA ışıktan korunmalıdır. Seyreltilmiş TPA, tercihen ışıktan korunarak -20 °C'de saklanır.
- Aşağıdaki ekipmanı temin edin: bir terazi, kürk için sıradan bir tıraş makinesi, pipetler ve uygun boyutta uçlar, sıradan bir cetvel, bir dijital kamera, bir not defteri ve papillomları kaydetmek için bir kalem veya bilgisayar, solunan bir anestezi sistemi veya arka üstte bir açıklık olan bir fare tutucu ve fareleri kurban etmek için bir karbondioksit narkoz sistemi.
2. Cilt Papilloma İndüksiyonu ve Teşviki
- Sırt derisini tıraş edin ve hayvanı tartın. Daha sonra, gerektiğinde cildi tıraş edin, ancak kimyasal maruziyet sırasında değil.
not: Papillomların etrafını tıraş ederken dikkatli olun ve ciltte herhangi bir kesik yapmaktan kaçının. Olası kilo kaybını fark etmek için her hayvanı 2 haftada bir tartın.
- Kürkü tıraştan 48 saat sonra bir pipet kullanarak traş edilen bölgeye topikal olarak 200 μL asetonda 50 μg DMBA uygulayın. Gerekirse, hafif inhalasyon anestezisi veya bir fare kısıtlayıcı kullanarak hayvanı kısıtlayın.
- 7 gün sonra ilk TPA dozunu verin. Haftada 2 kez, tercihen Pazartesi ve Perşembe veya Salı ve Cuma günleri bir pipetle topikal olarak 200 μL asetonda 5 μg TPA uygulayın.
- Her hafta papillomaları sayın, kaydedin ve fotoğraflayın. Çapı 1 mm'den büyük ele gelen bir kitle, 1 haftadan uzun süre kalırsa papillom olarak kabul edilir. Her bir papillomu bir harita üzerinde işaretleyin ve her hafta boyutunu listeleyin - dijital fotoğrafları saklayın.
