Primer Murin Melanositlerinin ve Fibroblastlarının Hızlı Kültürlenmesi: Tüm Murin Deri Örneğinden Melanositlerin ve Fibroblastların İzole Edilmesi

Özet

Kaynak: Murphy, B. M. et al. Primer murin melanosit ve fibroblast kültürlerinin hızlı üretimi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, doğum sonrası fare yavrusunun derisinden melanositleri ve fibroblastı aynı anda izole etmek ve kültürlemek için hızlı yöntem açıklanmaktadır. Bu hücreler, cilt hücresi biyolojisini, yara iyileşmesini ve melanomu incelemek için in vitro olarak korunabilir ve manipüle edilebilir.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Melanosit ve Fibroblast İzolasyonu

1. 0 ila 4 günlük erkek ve / veya dişi C57Bl / 6J yavrularını dekapitasyon ile ötenazi yapın ve cerrahi makas kullanarak ötenazi yapılmış farelerden ekstremiteleri çıkarın.
2. Laminer akış kabininde, her farenin gövdesini %70 etanol içeren steril bir Petri kabında kısaca yuvarlayın. Gövdeyi etanolden çıkarın ve boş, steril bir Petri kabına koyun.
3. % 70 etanol içinde sterilize edilmiş cerrahi makas kullanarak, boyundan kuyruğa....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Etanol, 200 kanıt	Balıkçı Bilimsel	22032601
Antibiyotik Antimikotik Solüsyon (100x)	Sigma-Aldrich	A5955
McIlwain Doku Doğrayıcı	Ted Pella'nın fotoğrafı.	10180
Doku Doğrayıcı Bıçak	Ted Pella'nın fotoğrafı.	121-6
Doku Doğrayıcı Plastik Disk	Ted Pella'nın fotoğrafı.	10180-01
Kollajenaz Tip I	Worthington Biyokimyasalları	LS004156
Domuz Tripsin	Sigma-Aldrich	85450C
Tripsin	VWR (VWR)	VWRL0154-0100
G418 Disülfür	P212121	LGB-418-1
Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Kartal Ortamı	Gibco (Gibco)	12800-082
RPMI 1640 ortamı	Sigma-Aldrich	R8758 Serisi
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Suyu	Sigma-Aldrich	D8537
6 oyuklu hücre kültürü kabı	Sigma-Aldrich	SIAL0516
5 mL polistiren yuvarlak tabanlı tüpler	Balıkçı Bilimsel	352008
10 cm hücre kültürü kabı	Corning	430167
Sığır Serumu Albümini	Balıkçı Bilimsel	BP9706-100
Fetal Sığır Serumu	Sigma-Aldrich	12306C
Corning Penisilin / Streptomisin Çözeltisi	Balıkçı Bilimsel	30-002-CL
Besin Karışımı F-12 Jambon Ortamı	Sigma-Aldrich	N6760
Sıçan kuyruğundan kollajen	Sigma-Aldrich	C7661
0,2 μm PES steril şırınga filtresi	VWR (VWR)	28145-501
40 μm hücre süzgeci	Balıkçı Bilimsel	22363547
70 μm hücre süzgeci	Balıkçı Bilimsel	22363548
Kolera toksini	Sigma-Aldrich	C8052
At Serumu	Balıkçı Bilimsel	26050088
HyClone L-Glutamin	Balıkçı Bilimsel	SH3003402

Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi