Method Article

CUBIC Tabanlı Protein Ekspresyonunun Görselleştirilmesi: Tam Kalınlıkta Fare Derisi Biyopsilerinde Protein Ekspresyonunun Görselleştirilmesi İçin Bir Prosedür

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Liang, H. et al. CUBIC protokolü, tüm mount cilt preparatlarında tek hücre çözünürlüğünde protein ekspresyonunu görselleştirir. J. Vis. Deneyim (2016)

Bu videoda, 3D olarak tek hücre çözünürlüğünde tam montajlı deri biyopsilerinde protein ekspresyonunun görsel olarak değerlendirilmesi için doku temizlemeye bağlı bir görüntüleme tekniği olan CUBIC tabanlı görselleştirme tekniği açıklanmaktadır. Teknik olarak basit olan bu protokol, cilt kesitleri hazırlamadan cilt proteinlerinin görselleştirilmesine olanak sağlar.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Şeffaf Fare Cilt Dokusunun Hazırlanması

>NOT: Bu çalışmada kullanılan tüm fareler C57BL/6 genetik arka planına sahipti

  1. Fare cilt dokusunun toplanması.
    1. Fareleri servikal çıkık ile insancıl bir şekilde ötenazi yapın.
    2. Cildi yaralamamaya özen göstererek bir düzeltici ile ilgili cilt bölgesindeki tüyleri dikkatlice alın.
    3. Fosfat Tamponlu Tuzlu Serum (PBS) içinde% 70 etanol ile dekontamine etmek için ci....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Görüntüleme odasının hazırlanması. C: Görüntüleme odasının hazırlanması için gerekli sarf malzemeleri mavi yapışkan, oyun hamuru veya benzeri ve 2 lamel (24 x 50 mm). B: İki ince mavi yapışkan şerit (çap yaklaşık 2 mm x 2 cm) ve iki lamel hazırlayın. C: Cilt biyopsisi için yeterli alan sağlayacak şekilde mavi yapışkan şeritleri bir lamel üzerine yerleştirin. .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ParaformaldehitSigma-AldrichP6418 Serisi
Etanol %96 (dolgunlaşmamış)Kimyasal tedarikUN1170
4',6-diamidino-2-fenilindol
(DAPI)		Roche10236276001
N,N,N',N'-tetrakis (2-hidroksipropil) etilendiaminMerck Kırlangıç821940
Polietilen glikol mono-p-izooktilfenil eterMerck Kırlangıç648462
Triton X-100Merck Kırlangıç648462
SakarozSigma-AldrichS0389 Serisi
Optimum Kesme Sıcaklığı
(EKİM) Bileşik		Doku-Tek4583
anti-Keratin14 antikoruCesaretPRB-155P
anti-Ki67 antikoruAbcam Belediyesiab16667
Eşek anti-tavşan Alexa 594Yaşam TeknolojileriA21207
DimetilsülfoksitSigma-AldrichD2650
üreMerck Kırlangıç66612
2,2",2"-nitrilotriaetanolMerck Kırlangıç137002
Konfokal MikroskopNikon Instruments IncNikon A1 - Konfokal Mikroskop
cruZer6 Yüz DüzelticiBraunBraun cruZer6 Yüz
Sodyum azidSigma-Aldrich438456
Gazetesi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Haber Kaynağı Gazetesi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

CUBIC ProtocolProtein ExpressionTissue ClearingConfocal MicroscopyWhole MountSkin BiopsiesAntibody StainingFluorescent Labeling3D ImagingSingle Cell Resolution

Related Articles