Minimum Eritematöz Doz Deneyi: Fare Modellerinde UV Duyarlılığını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Amaro-Ortiz, A. et al. İnsanlaştırılmış bir fare modelinde epidermal melaninin farmakolojik indüksiyonu ve güneş yanığına karşı koruma. J. Vis. Uzm. (2013)

Bu videoda, insan derisini taklit eden bir fare modeli olan insanlaştırılmış bir fare modelinde UV duyarlılığını ölçmeye yönelik bir yöntem açıklanmaktadır. Ciltte kızarıklık veya ödem oluşturabilecek UV radyasyonunun minimum eritematöz dozunu (MED) belirliyoruz. Yöntem, UV duyarlılığını azaltmak için kullanılan ilaçların etkinliğini bulmaya yardımcı olabilir.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

"Minimal Eritematöz Doz" (MED) Hesaplaması ile UV Duyarlılığının Belirlenmesi

1. Araç veya forskolin ile ön işlem görmüş hayvanları kullanın. Standart bir ketamin ve ksilazin karışımının intraperitoneal enjeksiyonu ile hayvanları uyuşturun.
2. MED testi için bir parça UV tıkayıcı bant hazırlayın. Bantta delikler oluşturmak için, 1 cm² dairesel kesimli ağır hizmet tipi bir delgeç kullanın (Şekil 1A ve B). Bantta tanımlanmış bir boyutta ve simetrik düzenlemede deliklere sahip olmak, ışınlamadan sonra cilt değişikliklerinin tanınmasını kolaylaştırır. Banttaki her deliğin üzerine, farklı UV dozlarının uygulanmasına izin vermek için UV'ye maruz kalma sırasında belirli zamanlarda çıkarılabilen küçük ama kolayca çıkarılabilir bir bant parçası uygulayın.
3. Hayvanlar yeterince sakinleştirildikten sonra, bandı sırt yüzeyine yerleştirin. Göz kayganlaştırıcı her zaman anestezi altında kullanılmalıdır.
4. 313 nm tepe çıkışına ve 280-370 nm aralığına sahip iki Westinghouse F15T8UV-B lambasından oluşan UV kaynağını açın. UVB sensörlü bir UV fotometre ile ölçüldüğü gibi lambanın sabit bir UV çıkışına dengelenmesine izin verin (lambaların ısınması genellikle birkaç dakika sürer).
5. UV Fotometre tarafından ölçülen UV iletim hızına bağlı olarak, istenen her doz için UV maruz kalma süresini hesaplayın. Örneğin, lambamızın UVB çıkışı 2,4 mW/^cm2'dir. Bu nedenle, 5 kJ/m² uygulamak için cildin aşağıda hesaplandığı gibi 208 saniye (3 dakika 28 saniye) UVB radyasyonuna maruz kalması gerekir:
   
6. UV maruziyetini eşit şekilde sağlamak için sedasyonlu hayvanları (her biri yerinde tıkayıcı bant bulunan) ventral yüzeye yerleştirin. Seçilen UV radyasyonu dozlarını uygulamak için, cildin 1^cm2 bölgesini doğru radyasyon dozlarına maruz bırakmak için delikleri kaplayan küçük tıkayıcı bantları sırayla çıkarın. Bu nedenle, yukarıdaki örneği kullanarak, deneydeki en büyük doz 40 kJ /^m2 ise, hayvan toplam 27 dakika ve 47 saniye boyunca lambanın altında kalacak ve 40 kJ /^m2 koşulundaki cildin üzerinde hiçbir bant olmayacaktır. Ancak, 5 kJ/^m2 koşulunun üzerindeki bant, pozlamada 208 saniye kaldığında çıkarılacaktır. Bandın çıkarılma zamanlaması, her koşulun aynı anda sona ereceği şekilde olmalıdır.
7. UV ışınlarına maruz kaldıktan sonra, cildi ani veya aşırı kuvvetli hareketlerle yırtmamaya dikkat ederek sırt derisindeki bandı dikkatlice soyun. Anesteziden iyileşmeyi sağlamak için hayvanları sıcak ve sessiz bir yere koyun.
8. Spesifik UV ışınlaması dozuna maruz kalan anatomik bölgelere karşılık gelen gizli eritem (kızarıklık) veya ödem (şişme) alanlarını aramak için fareleri 24-48 saat izleyin. Cilt bulgularını fotoğrafik olarak belgeleyin.
9. MED değeri, maruz kalan tüm cilt döngüsünün eritem ve/veya ödemi ile tanımlanan iltihaplanmaya neden olan minimum UV dozuna karşılık gelir. Cildin pigmentasyonunun MED'in belirlenmesine meydan okuyabileceğini unutmayın, ancak kısmen UV maruziyeti sırasında banttaki açıklıkların tanımlanmış şekli sayesinde eritem ve ödem hala genel olarak doğru bir şekilde değerlendirilebilir.

Sonuçlar

Şekil 1. Forskolin kaynaklı melanizasyon, minimal eritematöz doz (MED) testi ile belirlenen UV aracılı inflamasyona karşı koruma sağlar. (A,B) 5 gün boyunca günde iki kez (A, C) veya 15 gün boyunca günde bir kez (B, D, E) araç veya forskolin ile tedavi edilen hayvanların UV tıkayıcı bant ve UVB dozlarının konumu. Son topikal tedavi ışınlamadan 48 saat önce uygulandı. ...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ksilazin	Anased Enjeksiyon	LA04612	Shenandoah, Iowa, Amerika Birleşik Devletleri
Ketamin HCl, USP	Putney	NDC 26637-411-01	St. Joseph, MO, Amerika Birleşik Devletleri
etanol	Decon Laboratuvarları.	2705
Tüy dökücü krem, Nair	Dwight Kilisesi	JF-11 4381322	Priceton, Yeni Zelanda
Antiseptik Hg Lambası UV-B	Westinghouse	F15T8UV-B
Radyometre, fotometre	Uluslararası ışık	1LT400A	Peabody, MA, AMERİKA BİRLAŞTIRMA
İzothesia, İzofluran, USP	Uşak Schein	NCD 11695-6776-1	Dublin, OH, Amerika Birleşik Devletleri
Kromametre	Konica Minolta	CR-400	Ramsey, NJ, Amerika Birleşik Devletleri
Kromametre CR-400 için Veri İşlemcisi	Konica Minolta	DR-400	Ramsey, NJ, Amerika Birleşik Devletleri