$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Kronik-relapsing EAE indüksiyonu ve izleme
Emülsiyon takviye tam Freund adjuvan eklendi sulu çözelti antijeni 1:1 karışımıdır. Bu antijen adjuvan ve başka bir yol boyunca eklemek için çok önemlidir!
Yapma ve bir emülsiyon enjekte atık bir sürü. 1.5 veya 2 kez her zaman için ihtiyaç duyduğunuz herşeyi daha fazla hazırlamak.
Otoklavlanmış harç, havaneli, cam şırınga, ve köprüler kullanın. Tüm plastik steril olmalıdır. Düzenli bir laboratuvar tezgahı üzerinde hazırlık yapılabilir.
1. Takviye adjuvan hazırlanması
Mycobacterium tuberculosis (Difco katalog # 231.141) ve bir havan topu yerleştirmek 30 mg tartılır. Bakteri kırılma önlemek için çok sert basmadan ince toz haline olun. Freund adjuvan H37Ra (Difco katalog # 231.131) ve karışımı tam 10 ml ekleyin. Bu takviye adjuvan 4 mg / ml, Mycobacterium tuberculosis içerir. Tüpüne aktarın.
2. Spinal kord Homojenat hazırlanması
-80 Dondurulmuş DA sıçan (yaş / cinsiyet kayıtsız) ve mağaza ° C omurilik toplayın Takviye adjuvan: 1:1 (hacim ağırlığı) karıştırmak için yeterli donmuş omurilik tartılır. Bir jilet ile mümkün olduğunca ince olarak omurilik Kıyma, 1. kısımda kullanılan harç transferi ve havaneli bir hamur yapın.
3. Emülsiyon hazırlanması
- Place bir tüp Freund adjuvan tam desteklenmiştir. Yüksek hızda karıştırın. Vorteks ise omurilik Homojenat damla damla ekleyin. omurilik Homojenat tüm eklenir, 5 dakika daha karıştırın. Bu karışım hafif pembe açmalısınız.
- 5 ml cam şırınga içinde koyun ve emülsiyon (Fisher katalog # 14-825-17L) 18G köprü kullanarak başka bir 5 ml cam şırınga bağlamak. (5-10 dk) sabit hale gelinceye kadar, diğer bir şırınga emülsiyon gönder. Emülsiyon 5 ml 'den fazla hazır ise, birkaç 5 ml şırınga büyük şırınga KULLANMAYIN kullanın.
- Emülsiyon şırınga 4 ° C'de 3 hafta süreyle saklanabilir. Ben onu yıkmak değildir kontrol etmek için en az 12 saat önceden hazırlanması tavsiye ederiz. Bu kalın ve 2 faz ayrı kalmalıdır. Rengi sarı veya bej bir ışık gecede değişecektir.
4. Sıçan, Bağışıklama
- Birkaç dakika için şırınga emülsiyon karıştırın ve enjeksiyon için kullanılan şırınga transfer. 200 ul, çok kısa süreli anestezi altında 23G iğne ve 3 ml Luer-Lock şırınga kullanarak kuyruk dibinde subkutan enjekte edilir.
- Alıcılar 7-9 hafta eski kadın DA sıçan. Harlan Sprague Dawley sıçan olsun.
- Sıçanlar günde iki kez gözlenen ve günlük olarak değerlendirilmelidir. Klinik bulgular emülsiyon enjeksiyondan sonra 7-15 gün bekleniyor.
Klinik skorlama:
0: Herhangi bir hastalık
0.5: distal gevşek kuyruk
1: gevşek kuyruk
2: orta şiddette paraparezi, ataksi
3: orta derecede paraparezi, zaman zaman sıçanlarda gezileri
3.5: bir arka bacak felç, diğer hamle
4: tam arka ekstremite paralizisi
5: komple arka bacak felci ve inkontinans
6: can çekişen, nefes alma zorluğu, yemek veya içmek değildir. Hemen Euthanize.