Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Sarnıç zarının açılması
- Oksipital kemikten atlasa uzanan durayı tutmak için açılı Dumont forsepslerini kullanın. Durayı oksipital kemiğin yanından tutun ve durada küçük bir açıklık (~ 0,5 ila 1,5 mm) yapmak için yaylı makası kullanın.
NOT: Bu rostral konumda, beyin sapı ile üstteki dura arasındaki boşluk en geniştir ve duranın güvenli bir şekilde manipüle edilmesi için geniş alan sağlar. - Durayı kaldırmak ve durayı daha fazla açmak için yaylı makası kullanın. Pencerenin boyutu hedefe bağlıdır.
NOT: Birden fazla uzunlamasına enjeksiyon veya iki taraflı enjeksiyon yapılırken daha büyük bir pencereye ihtiyaç duyulacaktır; Tek taraflı veya orta hat enjeksiyonları yapılırken küçük bir pencere yeterli olacaktır. - Dura açıldıktan sonra, fazla beyin omurilik sıvısını steril bir işaret ucu ile boşaltın.
2. Yer işaretlerinin ve sıfır noktasının tanımlanması
- Beyin sapının dorsal yüzeyini açık dura boyunca ayrıntılı yer işaretleriyle görüntüleyin. Merkezi kanalın IV ventriküle açıldığı nokta olan obeks, standart ön-arka ve mediolateral sıfır noktasıdır.
3. Hedefin enjeksiyonu:
- Stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı hedefe indirin ve standart stereotaksik yaklaşımlarda olduğu gibi çözelti enjekte edin. 3-50 nL arasındaki hacimleri kullanırken iğne izini önlemek için enjeksiyondan sonra 1-50 dakika yerinde bırakın. Ardından, stereotaksik kolu kullanarak pipeti veya şırıngayı kaldırın.
- Birden fazla hedef için 3.1. adımını tekrarlayın.