Bu video, nöronal aktiviteyi modüle eden ve hipokampus ile iletişimi geliştiren, nöronal sağkalımı ve nörojenezi destekleyen derin beyin stimülasyonunu (DBS) uygulamak için sıçan beynine elektrot yerleştirme prosedürünü göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Sıçan Modelinde Derin Beyin Stimülasyonunun Hipokampal Nöronal Aktivite Üzerine Etkileri
733 görüntülenme
⸱
29 Ağustos 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Derin beyin stimülasyonu (DBS) Cerrahisi
- Ketamin / Xylazine karışımını intraperitoneal olarak hayvana enjekte edin ve cerrahi bir anestezi düzlemine ulaştığını doğrulayın (ayak parmağını kıstırma refleksini, solunum hızı derinliğini ve nefes almanın düzenliliğini kontrol ederek). Kafa derisinin kesilecek olan bölgesindeki saçları alın ve kafa derisini, her biri betadin ve alkol veya steril salin olmak üzere üç alternatif ovma ile dezenfekte edin. Hayvanı stereotaktik çerçeveye sabitleyin ve yerleştirin.
- Hayvanın vücut ısısını optimum seviyede tutmak için sirkülasyonlu ılık su pedleri kullanın. Hayvanın gözlerini aşırı kurumaya karşı korumak için göz kayganlaştırıcı sürün.
- ATN'yi (Anterior talamik çekirdek) hedeflemek için aşağıdaki stereotaktik koordinatları kullanın: anterioposterior -1.6 mm, mediolateral 1.5 mm ve dorsoventral 5.2 mm. Kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinde sagittal olarak bir kesi yapın. Bir çift ekartör kullanarak, kafatasını ortaya çıkarmak için kesilen kafa derisini sabitleyin. Kesiyi yıkamak için steril salin kullanın. Kesi çok ıslaksa, kurutmak için steril pamuklu çubuklar kullanın. Bregmayı bulun ve siyah bir kalemle işaretleyin. Çapak deliklerinin pozisyonunu yönlendirmek için, sagital sütürün her iki tarafında mediolateral olarak yaklaşık 1.5 mm'de ve koronal sütürün 1.6 mm arkasında iki işaret daha yapın.
- Çapak deliklerini açmak için elde tutulan bir matkap kullanın. Etanol ile sterilize ederek çapak deliğinin ucunun steril olduğundan emin olun. Delme sırasında matkabı kafatası yüzeyine yaklaşık 45° açıyla tutun. Herhangi bir çapak deliğinin bulunduğu yerde aşırı ısınmayı önlemek için iki çapak deliği arasında sık sık geçiş yapın.
- Dura açığa çıkana kadar delmeye devam edin. Ucu 'L' şeklini andıran bükülmüş bir iğne kullanarak, elektrotun yerleştirilmesini engelleyecek kırık kemik parçalarını çıkarın. Bükülmüş iğneyi kullanarak kemik parçalarını çıkarırken alttaki dura ve/veya beyin dokusuna zarar vermemeye dikkat edin.
NOT: Körelmiş bir iğne veya ince künt forseps kullanmak da bir seçenektir. - Çift elektrot tertibatını stereotaktik çerçevenin dönen koluna sabitleyin ve kolu 90° açıyla sabitleyin. Stereotaktik çerçevedeki ayarlamaları kullanarak, sol elektrodu tam olarak bregmanın üzerine yerleştirin.
- Mediolateral konumlandırma için stereotaktik ayarlamaları kullanarak, sol elektrodu bregmanın sol tarafına 1,5 mm hassasiyetle hareket ettirin, böylece artık koronal sütür boyunca mükemmel bir şekilde hizalanmış ancak bregmadan mediolateral olarak 1,5 mm aralıklı iki elektrot olacaktır.
- Anteroposterior stereotaktik ayarlamaları kullanarak, elektrotları koronal sütürün 1.6 mm posterioruna hareket ettirin.
- Elektrotları indirmek için dorsoventral ayarlamaları kullanın ve önce çapak deliklerinin, çapak deliklerinin pürüzlü kenarlarına dokunmadan elektrotların kolaylıkla yerleştirilebilmesi için doğru yerde yapılıp yapılmadığını kontrol edin. Eğer öyleyse, elektrotları kafatasının yüzeyinden 5,2 mm derinliğe yerleştirin.
- Elektrotları uçlar aracılığıyla 130 Hz, 2.5 V ve 90 μsn darbe genişliğinde ayarlanmış bir stimülatöre bağlayın.
- Bir saat boyunca (veya deney düzeneğine göre istenen bir süre boyunca) yüksek frekanslı stimülasyon sağlayın. Simülasyon sırasında, ayak parmağınızın sıkışmasına yanıt olarak ayağın geri çekilmediğini kontrol ederek düzenli olarak uygun anestezik derinliğini sağlamayı unutmayın. Anesteziyi indüklemek için kullanılan başlangıç dozunun yaklaşık yarısı ile anesteziyi destekleyin. Anestezik derinliği kontrol ederken steril eldivenlerinizin kirlenmesini önleyin ve gerekirse değiştirin. Kişinin deneysel ihtiyaçlarına göre tek taraflı veya iki taraflı stimülasyon gerçekleştirin. Düşük frekanslı stimülasyon (örneğin, 10 Hz) ve uyarılmamış hayvanlar (daha sonra stimülasyon olmadan elektrotların yerleştirilmesi) gibi kontrolleri dahil edin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Stereotaktik çerçeve | Kopf Instruments | Model 900 | |
| Matkap | Dremmel | 7700, 7.2 V | |
| Neşter | BD | 372610 | |
| Ketamin | Patterson Veteriner | 07-803-6637 | Çizelge III Kurumsal kurallara göre kontrollü madde, tedarik, kullanım ve depolama |
| Xylazine | Patterson Veteriner | 07-808-1947 | |
| Buprenorfin | Patterson Veteriner | 07-850-2280 | Çizelge III Kurumsal kurallara göre kontrollü madde, tedarik, kullanım ve depolama |
| Cerrahi zımbalar | ConMed Corporation | 8035 | |
| Sütürler (3-0) | Harvard Aparatı | 72-3333 | |
| Şırınga (1 ml, 29 1/2 G) | BD | 329464 | Steril, intraperitoneal Anestezi uygulaması için kullanın |
| Şırınga (3 ml, 25 G) | BD | 309570 | Steril, deri altından Analjezi uygulaması için kullanın |
| İğneler | BD | 305761 | Steril, çapak deliklerinden kırık kemik parçalarını temizlemek için kullanın |
| Etanol | Fisher Scientific | S25309B | Genel sterilizasyon için kullanın |
| Göz yağlayıcı | Fisher Scientific | 19-898-350 | |
| Stimülatör | Medtronic | Model 3628 | |
| DBS elektrotları | Rodos Tıbbi Aletler, CA | SNEX100x-100mm | Elektrotlar platindir, konsantrik ve bipolar |
| Betadin (Povidon-İyot) | PDI | S23125 | Tek kullanımlık çubuk çubukları, insizyon yapmadan önce kafa derisini sterilize etmek için kullanın |
