Bir fare modelinde noninvaziv nöromodülasyon için oftalmik ilaç uygulaması

Özet

Kaynak: Zhan, J., et al. DREADD Kontrollü Nöronal Aktivitenin Kronik Manipülasyonu için İnvaziv Olmayan Stratejiler. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, hedeflenen nöromodülasyon için invaziv olmayan bir oftalmik ilaç verme yöntemini göstermektedir. İlaç göz damlası yoluyla verilir, dolaşıma emilir, kan-beyin bariyerini geçer ve spesifik nöronal reseptörleri aktive eder.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Göz damlası kullanarak tekrarlayan klozapin-N-oksit (CNO) uygulaması

1. : Göz damlası uygulanmadan önce 3-4 gün boyunca her fareyi günde 3 dakika tırmıklayarak hayvanları elleçlemeye alıştırın.
2. Klozapin-N-oksit (CNO, 5 mg) 1 mL steril% 0.9 tuzlu su çözeltisi (stok çözeltisi: 5 mg CNO / mL) içinde çözülür. Solüsyonu 4°C'de buzdolabında saklayın.
3. Verilecek CNO miktarını belirlemek için deneye başlamadan önce her bir fareyi tartın. 1.0 mg CNO / kg vücut ağırlığı elde etmek için 1-3 μL damla (göz başına) kullanın.
   NOT: Örnek olarak, 20 g'lık bir fare iki taraflı (her biri 2 μL) göz damlası almalıdır.
4. Göz damlalarını farelerin inaktif (ışık) fazında, ışıklar kapanmadan 2 saat önce verin (zeitgeber time (ZT) 10). Farelerin aktif (karanlık) fazı sırasında CNO'nun verilmesi gereken durumlarda, uygun hayvan kullanımı için loş kırmızı ışığın varlığından emin olun.
   NOT: Deney hayvanlarının sirkadiyen (ve aydınlık/karanlık) döngüsünün bozulmasını önlemek için önlemler alınmalıdır.
   1. Bir P10 mikropipet kullanarak, 1.0 mg CNO/ kg elde etmek için gerekli miktarda (1-3 μL) CNO solüsyonu yükleyin.
      NOT: Her göz damlası için yeni ve steril bir pipet ucu kullanın. Bu deney setinde, iki taraflı CNO göz damlaları yapıldı; bununla birlikte, daha düşük bir CNO konsantrasyonu gerekiyorsa, tek taraflı göz damlaları da uygulanabilir.
   2. Fareyi tırnık yoluyla hareketsiz hale getirin.
   3. Pipet ucunda sabit bir damlacık oluşana kadar çözeltiyi yavaşça dışarı atın.
   4. Çözelti verilene kadar damlacığı dikkatlice farenin gözünün korneasına yaklaştırın. Pipet ucu asla farenin gözüne temas etmemelidir.
   5. Fareyi serbest bırakın ve ev kafesine geri yerleştirin.
5. Bu prosedürü 5 gün boyunca her gün tekrarlayın.
   NOT: Bu süre deneysel gereksinimlere göre ayarlanabilir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
BSA	Sigma yaşam bilimi	#A2153-100G	Liyofilize toz %≥96 (agaroz jel elektroforezi)
C57BL/6J fareler	Jackson laboratuvarı	#000664	erkek fareler, 3 aylık
Kılcal damarlar	Drummond Scientific Company	# 3-000-203-G / X	Dış çap: 1.14 in.
Klozapin-N-oksit	Sigma	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	İzofluran, USP
Mikroenjektör III	Drummond Scientific Company	# 3-000-207	Nanoject III - Programlanabilir Nanolitre
Enjektör Montaj ortamı	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold antifade reaktifi