Cisterna Magna Enjeksiyonu ile Bir Fare Modelinde Hedefe Yönelik İlaç Verilmesi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Zamboni, M., et al., İntrasisternal Enjeksiyon Yoluyla Leptomeningeal Hücre Modifikasyonunun İndüksiyonu. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magnasına bir indükleyici ilacın verilmesi prosedürünü göstermektedir. Enjeksiyon, floresan görüntüleme ile onaylanan, beyin omurilik sıvısı yoluyla erişilebilen beyin yüzey hücrelerinde seçici olarak floresan işaretleyici ekspresyonunu indükler.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Hayvanın Prosedür için Konumlandırılması

Hayvanın kafasını baş tutucusuna sabitleyin. Cisterna magna'ya erişilebilirliği artırmak için, hayvanın vücudunu masanın yüzeyinden yaklaşık 30° uzakta ve başı aşağı bakacak şekilde konumlandırın, vücudun geri kalanıyla 120°'lik bir açı oluşturun ve cisterna magna'ya erişimi kolaylaştırmak için boynun arkasını uzatın (Şekil 1A).
İşlem boyunca vücudunu desteklemek için hayvanın altına kağıt havlu ekleyin.
Ağızlıktan anestezi dağıtımını güvenli hale getirin ve izofluran konsantrasyonunu% 2.5'e ve hava dağıtımını 200 ml / dk'ya düşürün.
Oftalmik merhem sürün.

2. Cisterna Magna'nın Maruz Kalması

Hayvanın boynunun arkasını tıraş edin ve alanı% 70 etanol ve Betadine ile sterilize edin.
Cerrahi makas kullanarak, oksipital kemik seviyesinden başlayıp arkaya doğru uzanan bir orta hat kesisi (yaklaşık 7 mm uzunluğunda) yapın.
İnce uçlu cımbızla orta hattan yana doğru çekerek yüzeysel bağ dokusunu ve boyun kaslarını nazikçe ayırın. Bu, ters üçgen şeklinde cisterna magna'yı kaplayan dural zarı ortaya çıkaracaktır.
Ortaya çıkan kanamayı kontrol etmek için steril absorpsiyon mızrakları veya pamuklu çubuklar kullanın.
Boyun kaslarını kenara çekmek ve işlem boyunca cisterna magna'nın görüntülenmesini sağlamak için küçük bir cerrahi ayırıcı yerleştirin.

3. İntrasisternal Enjeksiyon

Cisterna magna'ya erişim sağlamak için, oksipital kemiğin kaudal ucunu belirleyin ve daha önce bükülmüş olan iğneyi hemen altına sokun.
NOT: Dural membran delindiği için dirençte ani bir düşüş olacaktır. Bununla birlikte, iğnenin ucu, kancalı şekli sayesinde meningeal yüzeyin çok az altına nüfuz edecektir.
Dura delindikten sonra, iğneyi kafatasına "asmak" için şırıngayı nazikçe yukarı ve hayvanın vücuduna paralel olarak çekerek iğnenin bükülmüş ucunun dural yüzeyin altına nüfuz etmesine izin verin (bkz. Şekil 1B). Bu, daha iyi stabilite sağlayacak ve iğnenin daha derine nüfuz etmesini önleyecek, böylece alttaki beyincik veya medullaya zarar verme riskini önleyecektir.
Beyin omurilik sıvısının doğal akışına müdahale etmemek için bileşiği yavaşça enjekte edin.
NOT: Deneyin amacına bağlı olarak, infüzyon hızı değişebilir. Yavaş ve sabit bir infüzyon hızı gerekiyorsa (ör., beyin omurilik sıvısı hareketini izlemek için prosedürü kullanırken), şırınga ile birlikte otomatik bir mikroinfüzyon sistemi kullanılması tavsiye edilebilir.
Enjeksiyondan sonra, iğneyi 1 dakika boyunca bölgede dinlendirin ve dikkatlice çıkarın. İğnenin kancalı konumundan geri çekilmesine yardımcı olmak için ince uçlu forseps kullanın.
NOT: İnce bir iğnenin (örn. 30 G) kullanılması, meningeal membranda önemli bir hasara ve bunun sonucunda beyin omurilik sıvısının dışarı çıkmasına neden olmaz. Daha büyük iğne boyutları gerekiyorsa, steril bir pamuk uç kullanarak enjeksiyon bölgesine basınç uygulayarak sıvı sızıntısını durdurmanızı öneririz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1: İntrasternal endoksifen enjeksiyonu yoluyla leptomeningeal hücrelerin spesifik etiketlemesi. Paneller A ve B, intrasternal uygulama için geliştirilen prosedürü göstermektedir. Cisterna magna'ya eriş...