Bir Murin Glioblastoma Modelinde Terapötik Nanopartiküllerin İntravenöz Uygulaması

Özet

Kaynak: Kim, B. D., et al. Bir Glioblastoma Multiforme Hayvan Modelinde Bir Oligonükleotid Yükünün Nanopartikül Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2024)

Bu video, glioblastoma taşıyan bir farede terapötik nanopartiküllerin intravenöz enjeksiyonunu göstermektedir. Yöntem, kan-beyin bariyeri boyunca hedefli iletimi mümkün kılar ve beyin tümörlerinde nanopartikül biyodağılımını ve terapötik etkinliği değerlendirmek için invaziv olmayan görüntülemeyi destekler.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. MN-anti-miR10b uygulaması

NOT: Bu çalışmada, enjeksiyonlar implantasyondan 7 gün sonra başlayarak 6 hafta boyunca haftada bir kez yapıldı, ancak aynı protokol çeşitli enjeksiyon sıklıkları için kullanılabilir.

1. Fareyi tartın ve fareye uygulanacak MN (manyetik nanoparçacık)-anti-miR10b hacmini hesaplayın. MN-anti-miR10b dozları, murin GBM (glioblastoma multiforme) modellerinde 20 mg Fe (demir) / kg'da verilir. Örneğin, 20 g'lık bir fare, 80 μL'lik bir 5 mg Fe / mL MN-anti-miR10b dozu alır. Kontrol fareleri, bu dozaj şemasına uygun olarak eşit hacimde PBS (fosfat tamponlu salin) alır.
2. MN-anti-miR10b dozu ile 28G'lik bir şırınga hazırlayın ve enjeksiyon solüsyonunda kabarcık olmadığından emin olun.
3. Bir indüksiyon kutusunda 1,5 L / dak akış hızı ile fareyi indüksiyon için %2-4 izofluran ve bakım için %1,5-%2 altında uyuşturun. Fareyi bir burun konisine getirin ve anestezi vermeye devam edin. Anestezi derinliğini kontrol edin ve veteriner merhemi uygulayın.
4. Kuyruğu %70 izopropanol mendille sterilize edin ve fazla alkolün kurumasını bekleyin.
5. Yanal kuyruk damarlarını kuyruğun üst kısmına yerleştirmek için kuyruğu döndürün. Ardından, damarı hedefleyerek iğneyi kuyruğa sokun ve pistonu geri çekerek bir vakum oluşturun.
6. İğneyi, kan şırıngaya girene kadar sokun, bu da damara başarılı bir şekilde girildiğini gösterir.
7. MN-anti-miR10b'yi yavaşça enjekte edin ve teslimat tamamlandıktan sonra iğneyi geri çekin. Kanama durana kadar enjeksiyon bölgesine gazlı bezle baskı uygulayın.
8. Fareyi burun konisinden çıkarın. Tamamen iyileşene ve ayakta tedavi edilene kadar fareyi izleyin.
   NOT: Nanopartiküllerin bolus uygulaması solunum sıkıntısına neden olabilir. Fareyi dikkatlice izleyin ve solunum sıkıntısı belirtileri varsa hemen hafif göğüs kompresyonları uygulayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Athymic nude "J:NU" fareler	Jackson Laboratory	RRID:IMSR_JAX:007850	Bağışıklığı baskılanmış fare modeli
%70 izopropoil alkollü mendil	Kardinal	MW-APL	tümör implantasyonu ve kuyruk damarı enjeksiyonu için topikal antiseptik mendil
Isofluran	Covetrus	11695067772	Anethesia
Isofluran buharlaştırıcı	SOMNI Scientific	VS6002	Anethesia aparatı
İnsülin şırıngası 1CC 29G X 1/2 "	Becton, Dickinson	324704	D-Luciferin enjeksiyonu ve nanopartiküllerin kuyruk damarı enjeksiyonu için şırınga