$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
NOT: Donör sıçanların deri ve kas bağışı prosedürlerinden önce yiyecek ve suya ücretsiz erişimine izin verilir. Ötenazi derin anestezi altında gerçekleştirilir ve ardından ikincil bir bilateral pnömotoraks yöntemi ile intrakardiyak potasyum klorür enjeksiyonu yapılır. Bu deneyde teorik olarak herhangi bir sıçan türü kullanılabilir; bununla birlikte, laboratuvarımız hem erkek hem de dişi Fischer F344 sıçanlarında (~ 200-250 g) iki ila dört aylıkken tutarlı sonuçlar elde etmiştir. Donör sıçanlar, deney sıçanlarına göre izojenik olmalıdır.
1. Dermal greftin hazırlanması
:
- Donör sıçanı, oksijende 0.8-1 L / dk'da% 5 izofluran çözeltisi kullanarak bir indüksiyon odasında uyuşturun. Sıçan anestezi uygulandıktan sonra, indüksiyon odasından çıkarın ve anestezinin sürdürülmesi için izofluranı% 2-2.5'e düşürerek yeniden soluyan bir burun konisine yerleştirin.
- Analjezi için omuz bıçakları arasında deri altından 0.2 mL steril salin içinde 0.02-0.03 mL Carprofen (50 mg / mL) solüsyonu uygulayın.
- Kornea ülserlerini önlemek için her iki göze de yapay gözyaşı merhemi sürün.
- Makas kullanarak tüm alt arka bacak(lar)ı, ayak bileği bölgesini ve pençe(ler)in yanlarını tıraş edin.
- Seçilen arka bacak ve pençenin plantar yüzeyini alkolle temizleyin, ardından iyodopovidon solüsyonu uygulayın ve artık iyodopovidonu çıkarmak için alkolle son bir temizlik ile sonlandırın.
- Çıkarılabilir yuvarlak ince taneli parlatma taşına (4000 rpm) sahip elde tutulan bir mikro motorlu yüksek hızlı matkap kullanarak, epidermisi çıkarmak için pençenin plantar yüzeyini çapaklayın. Çapak alırken, cildi yakmamak için tuzlu su damlaları uygulayın. Altta yatan dermis, noktasal kanama ile parlak bir görünüme sahip olacaktır.
- Kan akışını yavaşlatmak için alt ekstremiteye turnike uygulayın.
- Plantar cildi # 15 neşter ile keskin bir şekilde çıkarın ve kurumasını önlemek için tuzlu suyla nemlendirilmiş gazlı bez içine yerleştirin. Bazı tendinöz ve bağ dokusu bu adımda doğal olarak deri ile birlikte çıkarılacak ve daha sonra çıkarılacaktır.
- Kanamayı yavaşlatmak için kanayan ayağa gazlı bez sürün. İki yapı yapıyorsanız 1.5-1.9 adımlarını tekrarlayın.
- Mikroskop altında (20x büyütme), mikromakas kullanarak deri greftinin derin tabakasından tendinöz ve bağ dokusunu çıkarın. Greftte delik açmamaya özen gösteriniz. İnceltilmiş dermal greft, yaklaşık 0,5 cm x 1,0 cm boyutlarında, sadece dermis içeren hafif opak olmalıdır.
- C-RPNI yapı imalatına hazır olana kadar tuzlu suyla nemlendirilmiş gazlı beze yerleştirin. Greftler hasattan sonraki 2 saat içinde kullanılmalıdır.
2. Kas greftinin hazırlanması
:
- #15 neşter ile alt arka ayağın ön yüzü boyunca ayak bileğinin hemen üstünden dizin hemen altına kadar uzunlamasına bir kesi yapın. Altta yatan kas sistemini ortaya çıkarmak için deri altı dokusunu inceleyin.
- İnsizyonun distal yönünde, alt ekstremite kas sisteminin tendinöz girişlerini ortaya çıkarın. Tibialis anterior (TA) tipik olarak kasların en büyüğü ve en önüdür ve bu kasın hemen altında ve arkasında ekstansör digitorum longus (EDL) bulunur. Distal EDL tendonunu bölgedeki diğer tendonlardan izole edin ve bu noktada yerleştirilmesini kesmemeye dikkat edin.
- Bir forsepsin her iki dişini de tendonun altına sokarak ve tendon kaçmasına neden olacak şekilde forsepsleri açarak yukarı doğru basınç uygulayarak doğru tendonun izolasyonunu sağlayın. Bu tendonun manipülasyonu, tüm ayak parmaklarının aynı anda uzamasına neden olmalıdır.
- Keskin iris makası ile distal tenotomi yapın ve tenotomilerle (veya başka bir künt uçlu makasla) kası çevre dokulardan künt bir şekilde ayırın ve tendinöz kökeni bulmak için proksimal olarak çalışın.
- Proksimal tendon görüntülendikten sonra, keskin iris makası kullanarak tekrar bir tenotomi yapın. Kurumasını önlemek için kas greftini tuzlu suyla nemlendirilmiş bir gazlı beze yerleştirin.
- İstenen tüm greftler bir donör sıçandan çıkarıldıktan sonra, öncelikle intrakardiyak KCl enjeksiyonu (1-2 mEq K + / kg) ile ötenazi yapın, ardından # 15 bıçaklı bilateral ponksiyon pnömotoraks ile ikincil ötenazi yapın.
3. Ortak peroneal sinir izolasyonu ve hazırlığı
:
- Adım 1.1-1.3'te belirtilen protokole göre deneysel sıçanı uyuşturun ve analjezi sağlayın.
- İstenilen uyluğu tıraş edin ve alkol, betadin ile temizleyin ve betadin izlerini gidermek için alkolle sonlandırın.
- Hayvanı cerrahi hazırlık masasından cerrahi mikroskop masasına taşıyın ve vücut ısısını korumak için bir sıcaklık probu ile bir ısıtma yastığına yerleştirin. İzofluranı% 2-2.5'te ve oksijeni 0.8-1 L / dk'da tutun.
- Sadece distalden siyatik çentiğe ve dizin alt kısmına kadar uzanan insizyonu işaretleyin. Bu işaretleme uyluk kemiğinden daha düşük ve açılı olmalıdır. Kesiyonu, alttaki pazı femoris fasyasından keserek #15 bıçakla yapın.
- Biceps femoris kasını bir hemostat veya künt uçlu mikromakasla biceps femoris'in altındaki boşluğa dikkatlice inceleyin.
NOT: Siyatik sinir, yapılan ilk kesi ile yaklaşık olarak aynı yönde hareket eder. Tipik olarak sural sinir posterior ve ortak peroneal ve tibial sinir sırasıyla dizine yüzeysel ve derin hareket eden üç dal vardır. - Ortak peroneal (CP) sinirin tanımlanmasının ardından, bir çift mikro, ince uçlu forseps ve mikro makas kullanarak, CP sinirini diğer siyatik dallarından dikkatlice izole edin ve kalan bağ dokusunu distal olarak çıkarın.
- Sinirin diz yüzeyini geçtiği noktada, bir çift mikromakasla siniri keskin bir şekilde kesin.
NOT: Sinirde önemli travmaya neden olmak nöroma oluşumu riskini artırabileceğinden, bu adımda keskin makas kullanmak son derece önemlidir. - CP sinirinden kalan bağ dokusunu dikkatlice serbest bırakın ve siniri yaklaşık 2 cm uzunluğa kadar serbest bırakmak için proksimal olarak çalışın.
4. C-RPNI yapı imalatı:
- Kas greftini salinle nemlendirilmiş gazlı bezden çıkarın ve tüm merkezi tendinöz dokuyu ve ayrıca küçük bir merkezi epimisyum segmentini çıkarın. Tendinous uçlarını sağlam bırakın.
- 8-0 kullanma naylon sütür, CP sinirinin kesilen ucunun epinöryumunu, sinirin her iki tarafında iki kesintili dikişle epimisyumdan yoksun kas grefti alanına sabitleyin.
- Sinir-kas bileşkesi femurdan uzağa bakacak şekilde, hem proksimal hem de distal olarak tek bir 6-0 naylon kesikli dikişle kas greftini femur periostuna sabitleyin.
NOT: Kası normal, rahat uzunlukta olacak şekilde sabitleyin. Kasları önemli ölçüde germemeye veya kürleme sırasında çok fazla gevşeklik bırakmamaya çalışın. - 8-0'lık bir skor Kas grefti epimisyumunun inferior, merkezi kenarına naylon dikiş, kas grefti içindeki sinirde gevşeklik yaratacak şekilde CP sinir epinöryumuna sabitleyin ve daha sonraki ambulasyonla gelecekte maruz kalabileceği herhangi bir gerginliği hafifletmeye yardımcı olun.
- Deri greftini tuzlu suyla nemlendirilmiş gazlı bezden çıkarın ve siniri ve kasın çoğunu tamamen kaplayacak şekilde kas grefti üzerine yerleştirin. Dermisin derin kenarının kas üzerinde durduğundan emin olun. Kas sınırının ötesine uzanan herhangi bir dermisi kesin.
- Deri greftini 8-0 kullanarak çevresel olarak kas greftine sabitleyin naylon kesintili dikişler. Tipik olarak, yapının boyutuna bağlı olarak toplam 4-8 sütür kullanılır.
- Biceps femoris fasyasını 5-0 kromik sütür ile yapı üzerinde koşar bir şekilde kapatın.
- Üstteki cildi 4-0 kromik sütür ile koşu şeklinde kapatın.
- Cerrahi bölgeyi alkollü bir ped ile temizleyin ve antibiyotik merhem sürün.
- Soluma anestezisini durdurun ve farenin kafes arkadaşlarından ayrı yiyecek ve su kaynakları ile iyileşmesine izin verin.