Drosophila'da enfeksiyon bulaşma potansiyelini değerlendirmek için bakteriyel söküntü nicelendirilmesi

Özet

Kaynak: Siva-Jothy, J. A. ve diğerleri, Drosophila melanogaster'de Oral Bakteriyel Enfeksiyon ve Dökülme. J. Vis. Exp. (2018)

Bu video, enfekte bir sineği birden fazla gıda içeren tüp üzerinden aktararak, dökülen bakterileri geri kazanarak ve seri seyreltme ve kaplama yoluyla canlı kolonilerin nicelendirilmesiyle Drosophila'da bakteri sarkmasını izleme prosedürünü göstermektedir.

Protokol

1. Bakteri Dökülmesini Ölç
   1. Dökümü iç yükle birlikte ölçün.
   2. Enfeksiyondan sonra, tekli sinekleri 24 saat boyunca ~50 μL Lewis ortamı içeren 1,5 mL mikrosantrifüj tüplerine aktarın.
   3. İç yük ölçümü için sinekleri çıkarın ve tüpleri 100 μL 1x PBS (fosfat tamponlu tuzlu seriş) ile 3 saniye boyunca yoğun vorteksle yıkayın.
   4. Bu yıkamadaki CFU'ları (koloni oluşturan birimler) LB (Luria-Bertani) besin agari üzerine kaplama ile ölçün.
   5. Enfeksiyondan sonra, tekli sinekleri 24 saat boyunca ~50 μL Lewis ortamı içeren 1,5 mL mikrosantrifüj tüplerine aktarın.
   6. Sinekleri ~50 μL Lewis ortamı içeren yeni mikrosantrifüj tüplerine 24 saat daha aktarın. Kirlenmiş tüpleri 100 μL 1x PBS ile 3 saniye boyunca yoğun vorteks ile yıkayın.
   7. Bu yıkamadaki CFU'ları LB besin agari üzerine kaplama yaparak ölçün.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Şişeler	Sarstedt Ltd.	58.49	Polistiren düz tabanlı tüp 75mm x 23.5mm, 23ml
Agar	Sigma-Aldrich	A7002	Agar, kül %2,0-4,5%
Kahverengi şeker	Bidvest	66032	Açık kahverengi yumuşak şeker
Mısır	Dove'un Çiftliği		Organik mısır unu
Fermipan maya	Bidvest	96360	Kuru, hazır maya
Petri kapları	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 Petri Kabı 90 x 16.2MM Steril Üçlü Havalandırma
Eppendorf tüpü (1.5ml)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Sarstedt Mikro Tüp Konik Taban İtme Kapağı 1.5ml Standart Nötr
Etanol	VWR International Ltd.	20821.33	ETANOL MUTLAK ANALAR NP ACS/R.PE - Analitik Derecesi
LB buloru Miller	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Litrede 10g tripton, 5g maya ekstraktı, 10g sodyum klorür içerir
96-kuyu mikroplakası	Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd.	353072	Falcon 96 Tam Şeffaf Düz Tabanlı, TC ile İşlenmiş Polistiren Hücre Kültürü Mikroplakası, Kapaklı Steril
Vortex	Fisherbrand		Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V
10 μL Pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	741015	Gilson tarzı kolayca yükleyin. Mezuniyet oldu, temizlendi, doldur, 960 adet
200 μL Pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	741065	Gilson tarzı kolayca yükleyin. Mezuniyet oldu, temizlendi, doldur, 960 adet
1000 μL Pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	741045	Gilson tarzı kolayca yükleyin. Mezuniyet oldu, temizlendi, doldur, 960 adet
20 μL Filtreli pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	774288	Filtre ucu gilson tarzında. Şeffaf, raf mavi, tek paketli, R/Dnase içeri, 10 raf 96pc
200 μL Filtrelenmiş pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	739288	Filtre ucu gilson tarzında. Şeffaf, raf mavi, tek paketli, R/Dnase içeri, 10 raf 96pc
1000 μL Filtreli pipet uçları	Greiner Bio-one Inc	740288	Filtre ucu gilson tarzında. Şeffaf, rack blue, tek paketli, R/Dnase içerik, 10 adet 60pc raf