$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.
1. Pseudomonas aeruginosa ile aşılama
- Gece boyunca PAO1:lux kültürünü 75 mL Lizojeni suyu (LB) ortamında OD600 = 0.05 ile seyreldin ve kültür erken üstel faza (OD600≈0.3) geçene kadar bakteriyi büyütün. Bu yaklaşık 2–3 saat sürecektir.
- PAO1:lux'u fosfatlı tamponlu tuzlu suyla (PBS) (7,5 ± 2,5) x 102 CFU/mL konsantrasyona kadar seyreltirin. Deneyden sonra yeterli hacim ve kaplama için fazla inokulum hazırladığınızdan emin olun. Tesisler arasında taşıma yaparken, açıkça belirtilmiş bir Biyotehlike ile ilgili sızdırmaz bir kutuda çift muhafaza kullanın.
- P . aeruginosa ve farelerle ilgili tüm çalışmaları, Hayvan Biyogüvenliği Seviye 2 (ABSL-2) onaylı biyolojik güvenlik kabinesinde (BSC) onaylanmış kişisel koruyucu ekipman kullanarak gerçekleştirin. Tartı gibi yeniden kullanılabilir ekipmanlar, örneğin tartı kontaminasyonu önlemek için kaplama sargısıyla kaplanmalıdır.
- Fareyi %3 izofluran kullanarak anestezi edin. Fareyi tartın ve ağırlığı kaydedin. Fareyi deri altına önceden ısıtılmış steril %0,9 sodyum klorür, her yanda 250 μL enjekte ederek toplamda 500 μL elde edin.
- Farenin şeffaf film pansiyası gece boyunca döküldüyse, oluşan kabuğu dikkatlice çıkarın ve yeni bir pansman takın.
- Her yaraya şeffaf film sargısı aracılığıyla 40 μL PAO1:lux süspansiyon enjekte etmek için 500 μL tüberkülin 27 G güvenlik kapağı şırıngası kullanın. Karşı taraftan çapraz kontaminasyonu önlemek için aşılanmamış/PBS yara kontrolleri için farklı fareler kullanılmalıdır.
- Fareyi kafesine geri bir ısıtma pedine yerleştirin ve uyanana kadar izleyin. Tüm fareler, çapraz kontaminasyonu önlemek için ayrı kafeslerde ayrı ayrı olarak tutulmalıdır.
- Kafesin zeminindeki yiyecek pelletleri arasına sıkıştırılmış yüksek kalorili besin takviyesi macunu ekleyin.