Sistemik Bağışıklık Yanıtlarını İncelemek İçin Farelerde Bakteriyel Lipopolisakkarit Enjeksiyonu

Özet

Kaynak: Radulovic, K. ve diğerleri. Bağırsak bariyerinin aşılması sonrası mikrobiyal türevli ürünlerin girişini taklit etmek için farelere lipopolisakkarit enjeksiyonları. J. Vis. Exp. (2018)

Bu video, sistemik iltihabı indüklemek için farelere intraperitoneal olarak lipopolisakkarit (LPS) enjekte edilmesinin adım adım bir prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. Farelere Intraperitoneal Lipopolisakkarit (LPS) Enjeksiyonu
   1. LPS çalışma çözeltisini, 30 G'lik bir iğne ile laminar hava akışında 0,5 mL bir şırıngada aspire edin.
   2. Dişi C57Bl/6 fareleri (altı ila 10 haftalık) tartın ve enjekte edilecek LPS miktarını hesaplayın: 10 μL (2 μg)/g vücut ağırlığı.
      NOT: Örneğin, bir fare 20 g ağırlığındaysa, 20 g x 10 μL = 200 μL LPS çalışma çözeltisi enjekte edilmelidir.
   3. Faresi nazikçe ama sağlam tutun ve hayvanı tek elinizle tutun. Hayvanın normal nefes alabildiğinden emin olun ama kısıtlama sırasında bükülüp dönmemesini sağlayın.
   4. Fare burnunu hafifçe yere doğru eğip karın bölgesini enjeksiyon için açığa çıkar. Karın orta hattını ve enjeksiyon yerini alt karın bölgesinde, orta hattın soluna veya sağına yerleştirin. Kontrol farelerine LPS yerine intraperitoneal (i.p.) fosfatla tamponlanmış tuzlu su (PBS) enjekte edin.
   5. Serbest elle, LPS çalışma çözümünün uygun hacmini (adım 1.2'de hesaplanan hacm) enjekte edin. İğnenin periton boşluğuna girdiğinden emin olun, aksi takdirde karın kası tabakasına yanlış enjeksiyonlar olabilir. Yine de, iğneyi peritoneal boşluğa çok derine sokmayın, böylece o bölgedeki iç organlara zarar vermeyi önleyin.
   6. Hayvanı dikkatlice kafese geri getirin, her kafese en fazla 5 fare ekleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, San Diego, CA, ABD.	tlrl-eblps
Omnican 50 Tek kullanımlık insülin şırıngası	B. Braun Melsungen, Melsungen, Almanya	9151125