Bakteriyel Enfeksiyonun Görselleştirilmesi İçin Fare Mesanesi Dokusu Hazırlanması

Abstract

Kaynak: O'Brien, V. P. ve diğerleri, Tekrarlayan Escherichia coli Idrar Yolu Enfeksiyonu Gardnerella vaginalis mesane maruziyeti tarafından fare içinde tetikleniyor. J. Vis. Exp. (2020)

Bu video, önceden enfekte edilmiş bir fare modelinin mesane epitelinde bakteri kolonizasyonu ve konak-patojen etkileşimlerini görselleştirmek için taramalı elektron mikroskopisi kullanımını göstermektedir.

Protocol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. Taramalı elektron mikroskopisiyle mesane görüntüleme

   NOT: Bu işlem, üroteliumun görselleştirilmesi istenen herhangi bir zamanda gerçekleştirilebilir. Şekil 1'de (mor kutular) belirtildiği gibi, üropatojenik E. coli (UPEC) -ürotelyal etkileşimler, rezervuar oluşum aşamasında UPEC aşılamasından 6 saat ile 24 saat arasında en iyi şekilde görülür ve Gardnerella vaginalis tarafından tetiklenen ürotelyal eksfoliasyon en iyi şekilde ikinci G. vaginalis maruziyetinden....

Results

Şekil 1. Fare Modeli Şeması. Zaman çizelgesi, protokolde belirtilen modelin aşamalarını veya prosedürlerini yansıtacak şekilde vurgulanmıştır. Faz 1 (turuncu): Hücre içi üropatogenik E. coli (UPEC) rezervuarlarının oluşturulması. Far.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
30G x 1/2 iğne	BD	305106	Kateterler için
5 1/2" düz forsep hemostatı	McKesson	487377	Yerinde mesane fiksasyonu
ACE 600 Sputter kaplama	Leica		SEM örnek işleme
Alüminyum SEM kıvrımı	Ted Pella	16111	SEM örnek işleme
Kalsiyum klorür	EMS	12340	Yerinde mesane fiksasyonu
İletken karbon yapışkan tabı	Ted Pella	16084-1	SEM örnek işleme
İletken gümüş boya	Ted Pella	16034	SEM örnek işleme
CPD 300 Kritik Nokta Kurutucu	Leica		SEM örnek işleme
Sitohuni metal klipsi	Simport	M964B	Sitospin idrar tahlili
Etanol	EMS	15050	SEM örnek işleme
Glikoz	Sigma	G7528	NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için
Glutaraldehit	EMS	16320	Yerinde mesane fiksasyonu
Hema 3 boyama kiti	Fisher	23123869	Sitospin idrar tahlili
HEPES	Cellgro	25-060-Cl	NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için
İridyum	Ted Pella	91120	SEM örnek işleme
Merlin FE-SEM	Zeiss		Taramalı elektron mikroskobu
Milli-Q Su Temizleyici	Millipore	IQ-7000	SEM örnek işleme
Osmiyum tetrooksit	EMS	19170	SEM örnek işleme
Paraformaldehit	EMS	15710	Yerinde mesane fiksasyonu
Polietilen boru	Intramedic	427401	kateterler için
Proteoz Peptone #3	Fisher	DF-122-17-4	NYCIII G. vaginalis büyüme ortamı için
PTFE kaplı çift kenarlı jilet bıçağı	EMS	72000	SEM için kesim mesaneleri