Konak-Patojen Etkileşim Çalışmaları için Hemolitik Staphylococcus aureus Kültürü Hazırlanıyor

Özet

Kaynak: Behera, R.K. ve diğerleri, Enfekte Dokularda Bakteriyel Gen Düzenlemesini İnceleme Için Floresans Tabanlı Bir Yöntem. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, bakteri büyümesini standartlaştırmak ve konak-patojen etkileşim çalışmaları için metabolik senkronizasyonu sağlamak amacıyla hemolitik Staphylococcus aureus kültürlerinin hazırlanmasını göstermektedir.

Protokol

1. Bakteriyel inokulum hazırlama
   1. Streak Staphylococcus aureus türleri, donmuş gliserol stokundan kan agar plakalarında izole edilmek üzere ilgi çekici bir suş. Kırmızı kan hücrelerini (RBC) lizleme yeteneğine ve şeffaf bölgeler oluşturma yeteneğine dayalı hemolitik fenotipleri doğrulamak için 37 °C'de 16–24 saat kuluçka yapın.
   2. Her suşun tek kolonilerini steril cam tüplerde 4 mL triptik soya suyu (TSB) ile aşılayarak gece kültürlerini başlatın. Tüpleri yaklaşık 70° açı ve dakikada 70 dönüş (RPM) ile ayarlanmış bir boru rulosunda 37 °C'de 16–24 saat boyunca döndürün.
   3. Bir spektrofotometre kullanarak kültürlerin 600 nm (OD₆₀₀) aralığında optik yoğunluğunu 2.1.2. adımdan itibaren ölçebilirsiniz. Optik referans (boş) olarak steril ortam kullanın. Bu hücreleri ayrı 125 mL DeLong şişelerinde (5:1 şişe/hacim oranı) içinde 25 mL steril Triptik Soya Suyu (TSB) içinde_{0,05 OD 600'e} seyreldin ve kültürleri su banyosunda (kültürlere doğru ısı transferi için) inkübe edin; 280 RPM'de çalkalayıp 37 °C'ye ayarlanın.
      NOT: Aşı büyümesi çeşitli şekillerde gerçekleştirilebilir; Hücrelerin üstel faza yetiştirilmesi için bir yöntem sunulmaktadır. Her halükarda, hücreleri aşılamaya hazırlamak için aynı yöntemi sürekli kullanmak önemlidir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
%5 Koyun kanı	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Yörünge sallama su banyosu	New Brunswick Innova	NA
Triptik Soya Suyu	VWR	90000-376
UV-görünür spektrofotometre	Beckman Coulter-DU350	NA