1. M. abscessus enfeksiyonunun canlı görüntülemesi <ol><li>Epifloresan mikroskopisi gözlemlerinden önce 35 mm bir petri kabında %1 düşük erime noktasına sahip agarozda Mount tricaine-anestezilenmiş embriyolar. Ters konfokal mikroskopi için cam taban çanak veya dik konfokal mikroskopi için tek bir boşluklu depresyon kaydırması kullanın. Embriyonu istenen konuma yönlendirin ve sertleşmiş agarozu trikain içeren balık suyuyla kaplayın.</li><li>Tüm embriyonun ardışık floresans yakalaması ve iletim görüntüleri için 10 X hedefli epifloresan mikroskobu kullanın. Alternatif olarak, enfeksiyon sonrası bağışıklık hücrelerinin aktivitesini görselleştirmek için 40X veya 63X hedefli konfokal mikroskop kullanın.</li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>Düşük eriyen agaroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td> </td><td> </td></tr><tr><td>Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu (Trikain)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td> </td></tr></tbody></table>

mycobacterium abscessus ile enfekte olan zebrafish embriyolarında konak-patojen etkileşimlerinin canlı görüntülemesi

Kaynak: <a href='https://app.jove.com/v/53130/deciphering-imaging-pathogenesis-cording-mycobacterium-abscessus'>Bernut, A. ve diğerleri. Zebrafish embriyolarında Mycobacterium abscessus'un patogenezi ve kordonunun çözülmesi ve görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2015)</a>Bu video, floresan makrofajları ifade eden ve floresan Mycobacterium absessus kaba suşuyla enfekte olan transgenik zebrafish embriyolarını kullanarak konak-patojen etkileşimlerini görselleştiren bir protokolü göstermektedir. Ekstrahücre kordonunun bağışıklık kaçışını nasıl mümkün kıldığını, bakterilerin hayatta kalmasını ve konak hücre hasarını nasıl teşvik ettiğini ortaya koyar.

Mycobacterium abscessus ile enfekte olan zebrafish embriyolarında konak-patojen etkileşimlerinin canlı görüntülemesi

Source: Bernut, A., et al. Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (2015)This video ...

Floresan etiketli makrofajları ifade eden anestezi, şeffaf, transjenik zebrafish embriyolarıyla başlayın.Embriyolar, lokalize bir enfeksiyon oluşturmak için floresan işaretli Mycobacterium abscessus rough strain ile kuyruk kasına önceden enjekte edilir.Bu bakterilerde yüzey glikopeptidolipidlerinin olmaması, onların toplanmasını teşvik eder.Embriyoları düşük erime noktasına sahip agarozda immobilize edin ve enfeksiyon bölgesini açığa çıkaracak şekilde yönlendirin.Agararoz katılaştığında, anestezi sürdürmek ve dehidrasyonu önlemek için anestezi içeren balık suyu ekleyin.Enfeksiyonu floresan mikroskopi ile gerçek zamanlı olarak izleyin.Enfeksiyondan sonra, endozen makrofajlar bakterilere doğru göç eder ve bireysel hücreleri fagositoz yapar.Ancak bazı bakteriler, fagositoza karşı çoğalanan, yayılan ve dirençli uzun hücre dışı agregalar oluşturarak konak hücre ölümüne ve bağışıklık sızmasına neden olur.Buna rağmen, bağışıklık hücreleri kordonları yok edemez, bu da bakterilerin ve ölü konak hücrelerinin birikip apse oluşturmasına izin verir.Bu, kablolu bir anahtar M olduğunu ortaya koyar. Apses bağışıklık kaçış stratejisi.M. abscessus enfeksiyonunun canlı görüntülemesi için, trikain anestezi edilmiş embriyoları %1 düşük erime noktasına sahip agaroza 35 milimetrelik cam tabanlı Petri kabına ters mikroskop için monte etmek veya dik konfokal mikroskopi için tek bir boşluk depresyon slaytı yapmak üzere monte edilir. Embriyonu istenen konuma yönlendirin ve sertleşmiş agarozu trikain içeren balık suyuyla kaplayın. Son olarak, embriyoda ardışık floresan edinimi ve iletim görüntülemesi için 10X hedefli floresan mikroskobu veya 40X veya 63X hedefli floresan konfokal mikroskobu kullanın.

live-imaging-host-pathogen-interactions-zebrafish-embryos-infected

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

Mikrobiyoloji

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

Bakteriyel Patogenez ve Konak Etkileşimleri

bacterial-pathogenesis-and-host-interactions

Infection Imaging & Detection

Enfeksiyon Görüntüleme ve Tespiti

Live Imaging of Host-Pathogen Interactions in Zebrafish Embryos Infected with Mycobacterium abscessus

232 Görüntüleme. Floresan etiketli makrofajları ifade eden anestezi, şeffaf, transjenik zebrafish embriyolarıyla başlayın.Embriyolar, lokalize bir enfeksiyon oluşturmak için floresan işaretli Mycobacterium abscessus rough strain ile kuyruk kasına önceden enjekte edilir.Bu bakterilerde yüzey glikopeptidolipidlerinin olmaması, onların toplanmasını teşvik eder.Embriyoları düşük erime noktasına sahip agarozda immobilize edin ve enfeksiyon bölgesini açığa...

Mycobacterium abscessus ile enfekte olan zebrafish embriyolarında konak-patojen etkileşimlerinin canlı görüntülemesi

Bu makalede

Özet

Protokol

Malzemeler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Düşük eriyen agaroz	Sigma-Aldrich
Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu (Trikain)	Sigma-Aldrich	A5040