Bakteriyel ekzopolisakkarit bozunmasını değerlendirmek için ince katmanlı kromatografi yapılması

Özet

Kaynak: Hu, Y. ve diğerleri. Endobiyotikler ile İnsan bağırsak mikrobiyotası arasındaki etkileşimlerin In vitro banyo fermantasyon sistemleri kullanılarak analizi. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, insan dışkı mikrobiyotası tarafından ekzopolisakkaridlerin (EPS) parçalanmasını değerlendirmek için ince katmanlı kromatografi (TLC) kullanımını göstermektedir. Fermantasyon süpernatantlarındaki EPS parçaları, TLC kullanılarak boyut ve polariteye göre ayrılır, ardından karbonhidrat-spesifik boyama sonrası renkli bantlar olarak görselleştirilir.

Protokol

1. İnsan dışkı mikrobiyotası tarafından ekzopolisakkarit (EPS) parçalanması

1. 0,2 μL fermente edilmiş süpernatantları önceden kaplanmış silika jel-60 ince katmanlı kromatografi (TLC) alüminyum plakalarına yükleyin, ardından saç kurutma makinesiyle kurutabilirsiniz.
2. Plakaları 20 mL formik asit/n-butanol/su (6:4:1, v:v:v) çözeltisinde geliştirin ve saç kurutma makinesiyle kurutun.
3. Plakaları orcinol reaktifinde boyayarak boyayabilir, ardından saç kurutma makinesiyle kurutabilirsiniz.
   1. Orsinol reaktiflerini 25 mL damıtılmış suda 900 mg likenol çözünerek ve ardından 375 mL etanol ekleyerek hazırlayın. Sonuç olarak, konsantre sülfürik asit yavaşça eklenmeli ve çözelti iyice karıştırılmalıdır.
4. Plakaları 120 °C'de fırında 3 dakika ısıtın ve TLC bantlarını ölçerek EPS'nin bozulmasını değerlendirin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Fırın fırını	Şanghay Yiheng Bilimsel Aletler A., Ltd	DHG-9240A	Isıtmak ve pişirmek için kullanılır
Etanol	Sigma-Aldrich	E7023	K1 vitamini hazırlamak için kullanın
Formik asit	Sigma-Aldrich	399388	Bakım için Kullanılıyor
Lichenol	Solarbio	C8380	Renk plakası hazırlamak için kullanım
n-Butanol	ChemSpider	71-36-3	Bakım için Kullanılıyor
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Orcinol reaktiflerinin hazırlanmasında kullanılır
Sülfürik asit	Sigma-Aldrich	150692	Orcinol reaktiflerinin hazırlanmasında kullanılır
TLC alüminyum levhalar	MerckMillipore	116835	Bakım için Kullanılıyor