Ekzopolisakkaridler üzerindeki İnsan Bağırsağı Mikrobiyal Aktivitesinin Araştırılması

Özet

Kaynak: Hu, Y. et.al., Endobiyotikler ile İnsan Bağırsak Mikrobiyotası Arasındaki Etkileşimlerin In Vitro Banyo Fermantasyon Sistemleri Kullanılarak Analizi. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, insan bağırsak mikrobiyotasının ekzopolisakkaritlere karşı kısa zincirli yağ asidi üretiminin analizini göstermektedir. Bu, mikrobiyal fermantasyon ürünlerinin ayrılmasını ve gaz kromatografisi kullanılarak nicelendirilmesini vurgular. Sonuçlar, ekzopolisakkaridlerin bağırsaktaki konak-patojen dinamiklerini etkileyen mikrobiyal metabolitleri modüle ettiğini ortaya koymaktadır.

Protokol

1. Ekzopolisakkaridin (EPS) insan bağırsak mikrobiyotasının kısa zincirli yağ asidi (SCFA) üretimi üzerindeki etkileri
   1. 5.3 ila 2 mL santrifüj tüplerinde hazırlanmış fermente süpernatanlar (1 mL) ekleyin.
   2. Her bir numuneye %25 (w/v) metafosforik asit 0,2 mL ekleyin ve çözeltileri vortexle ile iyice karıştırın.
   3. Karışımları 13.000 x g ile 20 dakika boyunca santrifüjle yapın ve süpernatanları yeni tüplere aktarın.
   4. Aynı zamanda, 120 mM asetik, propionik, bütürik, izobutirik, valerik ve izovalerik asitlerden oluşan çözeltiler hazırlanır. Sonra, her hazırlanmış asidin 1 mL'sini %25 (w/v) metafosforik asite 1....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
0.22 μm membran filtreleri	Millipore	SLGP033RB	Örnekleri filtrelemek için kullanım
0.4 mm elek	Termo Fischer	308080-99-1	İnsan dışkı örnekleri hazırlamak için kullanım
Asetik	Sigma-Aldrich	71251	SCFA için standart örnek
Bütirik	Sigma-Aldrich	19215	SCFA için standart örnek
Kapiler sütun	SHIMADZU-GL	InertCap FFAP (0,25 mm × 30 m × 0,25 μm)	SCFA algılamasında kullanılmıştır
Gaz kromatografisi	Shimadzu Şirketi	GC-2010 Plus	SCFA algılamasında kullanılmıştır
İzobutirik	Sigma-Aldrich	46935-U	SCFA için standart örnek
İzovalerik Asitler	Sigma-Aldrich	129542	SCFA için standart örnek
Metafosforik Asit	Sigma-Aldrich	B7350	SCFA için standart örnek
NaOH	Sigma-Aldrich	30620	Tamponların pH'ını ayarlamak için kullanılan temel çözelti
Propionik	Sigma-Aldrich	94425	SCFA için standart örnek
Valeric	Sigma-Aldrich	75054	SCFA için standart örnek