Kronik bağırsak enfeksiyonu fare modelinde doku bakteriyel yükünün nicelendirilmesi

Abstract

Kaynak: Lo, B. C. ve diğerleri. Kronik Salmonella enfeksiyonu bağırsak fibrozisine neden olmuştur. J. Vis. Exp. (2019)

Video, streptomisin dirençli Salmonella typhimurium ile kronik enfeksiyonun fare modelinde bakteriyel yükün nicelendirilmesini gösteriyor. Ötenazi ve steril diseksiyondan sonra, çek ve dalak dokuları toplanır, bakteriler salınmak için çelik boncuklarla homojenleştirilir ve seri olarak seyreltilir. Sulandırmalar seçici agar'da kaplanır ve görünür koloniler sayılır; böylece bağırsak ve sistemik bölgelerde doku gramı başına bakteri yükü tahmin edilir.

Protocol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. Salmonella Typhimurium ΔAroA kültürlerinin farelerin oral garajı için hazırlanması

1. S. Typhimurium ΔAroA'nın donmuş gliserol stokundan, steril aşılama döngüsüyle 100 μg/mL streptomisin içeren Luria-Bertani agar (LB agar) ile bir çizgi plakası hazırlanır. Gece boyunca 37 °C'de kuluçka yapın. Çizgi plakaları 4 °C'de bir haftaya kadar saklanabilir.
2. Enfeksiyondan bir gün önce, antibiyotiği 2,5 mL suda 0,5 g streptomisin eriterek hazırlayın. Streptomisin çözeltisi ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2 ml yuvarlak tabanlı güvenli kilitli tüpler	Eppendorf	22363344
Paslanmaz çelik boncuklar	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Büyük Delikli Pipet Uçları	Fisher	2707134
2 mL megablok plakalar	Sarstedt	82.1972.002
Gavaj iğneleri	FST	18061-22
Streptomisin sülfat	Sigma	S9137
Mikser değirmeni	Retsch	MM