Biyofilm oluşumunun enzim aracılı inhibisyonunun mikroskobik değerlendirmesi

Özet

Kaynak: Tay, S. B., et.al. Mühendislik Amaçlı Kuorum Söndüren Laktonazlar Kullanılarak Patojenik Biyofilmlerin Anti-Virülent Bozulması. J. Vis. Exp. (2016)

Bu video, bakteriyel hücre sinyalini bozan bir enzimin eklenmesiyle biyofilm oluşumunu inhibre etme sürecini göstermektedir. Bu enzim, bakterilerin hücre dışı polimerik maddeler üretmesini engeller ve böylece cam tabanlı mikro tabak üzerinde biyofilm gelişimini azaltır. Son olarak, biyofilm yapısı floresan lektinler ve konfokal lazer tarama mikroskopisi kullanılarak görselleştirilir.

Protokol

1. A. baumannii S1 biyofilminin Konfokal Lazer Taramalı Mikroskopisi

1. A . baumannii S1'in 5 ml kültürünü LB'de 30 °C'de sallama inkubatörde (220 rpm) 16 saat boyunca yetiştirin.

2. A. baumannii S1'in kültürünü istenen OD₆₀₀ 0.8'e ayarlayın. 35 mm cam tabanlı μ-Dish kullanarak, bakteri kültürünü (1:100 seyreltme) taze LB içinde 30 μl saflaştırılmış GKL enzimi (40 mg/ml) içeren taze LB içine aşılayın; Yeni kültürün son hacmi 1 ml'dir.

3. μ-Tabağı bir kapla kapatın ve kapalı 10 L'lik plastik bir kaba yerleştirin. μ Tabağı 30 °C'de 3 saat kuluçka altına alın, ardından ortamı nazikçe çıkarın....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Tripton	BD	211705
Maya Ekstraktı	BD	212750
96 kuyu plakası	Yardımcı Oyuncu	3596
Asetik Asit	Laboratuvar taraması	PLA00654X	Dikkat: Yanıcı
μ-Dish	İbidi	80136
Alex Fluo 488-çekimli WGA	Invitrogen	W11261
Hank'in dengeli tuz çözeltisi	Invitrogen	141475095
Formaldehit	Sigma-Aldrich	F8775	Dikkat: Korozif
Synergy HT Microplate Reader	BioTek
1X-81 Ters Floresan Mikroskobu	Olympus