Fare modelinde kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonu

Özet

Kaynak: Conover, M. S. ve diğerleri, J. Fare Modelinde İYİS ve KAUTI'nin Kuruluşu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Exp. (2015)

Bu video, dişi bir farede transüretral kateter montajı ve implantasyonunu, ardından kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonunu belirlemek ve biyofilm aracılı konak-patojen etkileşimlerini araştırmak için bakteriyel aşılama prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. CAUTI (Kateterle ilişkili idrar yolu enfeksiyonu) Model Protokolü, CAUTI Modeli için Kateter İğne Hazırlığı

1. 30 G'lik iğnenin kapağını çıkarın. 7 mm PE10 (polietilen 10) boru ve 5 mm silikon boru (örneğin RenaSIL) kesin. İğneyi PE10 borusuyla geçirin, ta ki boru iğnenin tabanına değene kadar.
2. Sonra 5 mm parçayı PE10 içeren iğneye dayandırın. UV (ultraviyole cihazı) iğne montajlarını gece boyunca sterilize eder.
   NOT: Silikon boru yüklerken, yaklaşık 1 mm kısmı iğne ucundan dışarı kadar uzanan şekilde bırakın.

2. E. faecalis OG1RF Bakteriyel Aşı Hazırlığı

1. Aşılama gününden 48 saat önce OG1RF aşısını hazırlayın. OG1RF'yi donmuş bir stoktan BHI (beyin kalp infüzyonu) plakasına çizin.
2. Bir koloni seçin, 10 ml BHI aşılayın ve 37 °C'de 18 saat statik şekilde yetiştirin. Kültürü santrifüjle yapın ve pelleti 1 ml steril 1x PBS hacminde (3 kez) yıkayın.
3. Bakteriyel pelleti 1x PBS (fosfatla tamponlanmış tuzlu seriş) içinde yeniden süzülür. Bakteriyel optik yoğunluğu ölçün ve konsantrasyonu istenen aşı boyutuna ayarlayın. Kullanılan aşı standart konsantrasyonu 10^7'dir; ancak bu, çalışmanın tasarımına bağlı olarak değişiklik gösterebilir

3. Kateter Implantasyonu

1. İş istasyonunu %70 etanol ile temizleyin ve alanı emici bir kapakla kapatın (veya steril bir akış başlığı kullanın).
2. Kateter iğnesini boş 1 ml (TB veya tüberkülin) bir şırıngaya takın. 1 inç kare parafilm parçası kesin ve üstüne yaklaşık bir kuruş büyüklüğünde cerrahi yağlayıcı sürün.
   NOT: Kateterin biriktirilmesi ve inokulum için iki farklı iğne, kateter implantasyonu için gerekli mekanik manipülasyon nedeniyle kazara aşılanmayı en aza indirmek amacıyla kullanılır. Bu aynı zamanda daha az aşı iğnesi hazırlanmanın kolaylığını da sağlar.
3. C57BL/6 farelerini, 3 ml izofluran veya buharlaştırıcı odasına batırılmış pamuk topları içeren 32 onsluk cam bir kavanozda anestezi edin; bu kavanozlar 3 ml izofluran veya buharlaştırıcı odasına (üreticinin protokolüne uygun olarak) bilinçsiz kalana kadar (1 nefes/saniye) alın.
4. Sonra fareyi sırt üstü bir kağıt havluya koyup bacaklarını aç. Farenin burnunu burun koni veya az miktarda (yaklaşık 1-2 ml) izofluran içeren pamuk topları içeren 50 ml'lik konik bir tüple kapatın.
   DIKKAT: İzofluran inhalasyon anestezisidir. İyi havalandırılan bir alanda kullanın ve araştırmacının solumasını en aza indirin.
5. Mesaneyi hafifçe çarptırarak idrar çıkarmayı teşvik edin ve boş bir mesane oluşmasını sağlayın. Periuretral alanı %100 etanol mendil ile silin.
6. Periuretral bölgeyi pamuk ucu aplikatörü kullanarak %10 povidon-iyot çözeltisiyle dezenfekte edin. Aşı iğnesi/şırıngasını başta cerrahi kayganlaştırıcıya söndürün.
   NOT: Povidon-iyot, kateter implantasyonu için kullanılır; bu alkolden daha güçlü bir aseptik çözeltidir. Kateter implantasyonu, kateteri yerleştirmek için daha fazla mekanik manipülasyon gerektirir ve bu nedenle kontaminasyon potansiyeli daha yüksektir.
7. Kateteri üretra açıklığına yerleştirin. İçeri girdikten sonra, (7 mm PE10) uzun parçayı mesane yönüne doğru itmek için cımbız kullanın, ardından (5 mm silikonlu) küçük kateteri itip mesane içine yerleştirin. 7 mm boru hala takılıyken iğneyi hemen çıkarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kateter ve iğne hazırlığı için malzeme:
30 G iğneler	BD Hassas Süzülme	305106	30 G x 1/2 (0.3 mm x 13 mm)
PE10 polietilen boru	BD	427400	İç çapı -0,011 inç (0,28 mm); dış çapı – 0.024 inç (0.61 mm)
RenaSIL 025 platin kürlenmiş silikon boru	Braintree Scientific, Inc	SIL 025	iç çap-0.012 x dış çapı 0.025, 25 ft bobin
Enfeksiyonlar için malzeme:
İzoflunan – İzotezi	Uşak Schein	29405	250 ml
Şeffaf cam düz taraflı kavanoz	Kimble Chase	5413289V 21
Paslanmaz çelik çay infüzörü	Schefs-Amazon		Premium Gevşek Yaprak Çay Infüzörü Schefs tarafından - Paslanmaz Çelik - Büyük Kapasite -
Steril olmayan pamuk topları	Fisherbrand	22-456-880
50 ml Falcon tüpleri	VWR	89039-660
Isotec 3 -buharlaştırıcı	Ohmeda	1224478
Kulak yumruğu	Fisher Scientific	13-812-201	(gerektiğinde)
Betadine çözeltisi	Betadine çözeltisi		%10 Povidie-iyot topikal çözeltisi
Q-uçları	Fisher Scientific	22-037-924	6 inç
Tezgah için bezler	Fisherbrand	14206 63	Emici alt pedler (20"X36" matlar)
Cerrahi yağlayıcı	Surgilube	0281-0205-36
Diseksiyon makası	Fine Science tools, INC	14084-08
Micro-Adson Forseps	Fine Science tools, INC	11018-12
1 ml şırınga	BD	309659	Tüberkülin kayma ucu
Parafilm	Bemis	PM996	4 inç x 125 FT
Eppendorf rafı	Fisherbrand	05-541-1
Eppendorf tüpleri	MIDSCI	AVX-T-17-C
Kateter, mesane ve böbrek toplama:
Homojenizer	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
5 ml polipropilen yuvarlak tabanlı tüp	BD	352063	organ homojenizasyonu için
Kağıt havlu	Georgia-Pacific
Etanol	Pharmco-AAPER	11100020S	200 ispat
Costar™ Şeffaf Polistiren 96-Hole Plakaları	Corning	3788
1x Fosfat sodyum tuzlu su	Sigma-Aldrich	P3813
BRANSONIC Ultrasonik Temizleyici 1210	Branson Ultrasonik Şirketi	1210