Patojenik Bakterilerle Yanık Enfeksiyonlarının Fare Modeli Oluşturmak

Özet

Kaynak: Wang, Y. ve diğerleri. In Vivo'da Çoklu ilaç dirençli Acinetobacter baumannii yanık enfeksiyonlarında biyolüminesans görüntüleme kullanılarak antimikrobiyal mavi ışık tedavisinin araştırılması. J. Vis. Exp. (2017)

Bu video, fare modelinde ısıtılmış pirinç blok uygulanarak ardından patojenik bakteriyel aşı uygulanarak yanık enfeksiyonu nasıl oluşturulacağını gösteriyor. Bakteriler, açıkta kalan ekstrasellüler matriksi kolonileştirir ve bir biyofilm oluşturur; bu da konak-patojen etkileşimlerinin in vivo çalışmalarını mümkün kılar.

Protokol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. Bioluminescent Acinetobacter baumannii tarafından Neden Olan Yanık Enfeksiyonu Fare Modeli

1. 7-8 haftalık ve 17-19 g ağırlığında yetişkin dişi BALB/c fareleri kullanın. Deney başlamadan önce farelerin laboratuvar koşullarına alışmalarına en az 3 gün izin verin. Fareleri 21 °C oda sıcaklığında 12 saatlik ışık/karanlık döngüde tutun ve onlara yiyecek ve su verin.
2. Fareleri, ketamin-ksilazin kokteyli (100 mg/kg-20 mg/kg) intraperitoneal enjeksiyonla anestezi edin. Her farenin palpebrasına hafifçe pamuk çubukla dokun; Palpebral refleksin olmaması, uygun bir anestezik derinliğini gösterir. Anestezi sırasında kurumasını önlemek için farenin gözlerini veteriner merhemiyle kapatın.
3. Farelerin sırtını tıraş ederek mümkün olduğunca çok deriyi açığa çıkarmak için 50 bıçaklı saç makası kullanın.
4. Her farenin karnının altına 35 mm Petri kapağının kapağını yerleştirerek sırtlarını nispeten yatay tutun.
5. Suyu 250 mL'lik bir beakerde (%80 dolu) 10" x 10", 220 volt alternatif akım (VAC) sıcak plaka kullanarak kaynatın. Bir pirinç bloğu (1 cm x 1 cm kesit) beaker'e daldırın, ta ki su ile termal dengeye ulaşılana kadar. Termal denge genellikle <5 dakika sürer ve beakerdeki suyun yeniden kaynamasıyla belirtilir.
6. Yanık yaralanması oluşmadan önce, ağrı kesgitleyici için önleyici analjezikler (0,1 mg/kg buprenorfin deri altı enjeksiyonu) uygulanır.
7. Önleyici analjeziklerden on dakika sonra, ısıtılmış pirinç bloğu farelerin arkasındaki tıraş bölgesine 7 saniye boyunca nazikçe bastırarak yanık yaralarını tetikleyin.
   NOT: Çalışan personelin termal yaralanmasını önlemek için, yakma işlemi sırasında termal dayanıklı eldivenler giyin.
8. Dehidrasyonu önlemek için deri altı enjeksiyonla 0,5 ml steril salin verin.
9. Termal yaralanma indüklendikten beş dakika sonra, 5 x 10⁶ koloni oluşturan birim (CFU) içeren 50 μL bakteriyel süspansiyon, fosfatla tamponlanmış tuzlu salin (PBS) içinde fare yanıklarına pipet kullanılarak aşılanacaktır. Sonra, steril pamuklu çubukla cilde zikzak hareketi yaparak, yanıkların üzerine aliquotları sürerek bakteri hücrelerini yanmış bölgeye mümkün olduğunca eşit dağıtın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Fare	Charles River Laboratuvarları, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 haftalık, 17-19 g ağırlık
Acinetobacter baumannii	Brooke Ordu Tıp Merkezi, Fort Sam Houston, TX	Klinik izolat	Mühendislik edilmiş parıltı gerilim
İnsülin şırıngaları	Fisher Scientific	14-826-79	BD Enjeksiyon için Lo-Doz U-100 İnsülin şırıngaları
Sodyum klorür	Fisher Scientific	721016	%0,9 Sodyum klorür
Fosfatla tamponlanmış tuzlu send, 1x çözelti	Fisher Scientific	BP24384	Birçok biyomoleküler işlemde kullanılan standart bir fosfat tamponu
Aşılama döngüleri	Fisher Scientific	22-363-605	Farelerin yanık yüzeyine bakteriyel inoklum yaymak için
Bakır blok	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm x 10 mm	Farelerde yanık oluşumu için
Extreme Dragon PBI/Kevlar yüksek ısılı eldivenler	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Isıya dayanıklı eldivenler
Greiner yemekleri	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Corning dijital sıcak plaka	Cole-Parmer Enstrüman Şirketi, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, kaynar su için
Fare/Fare ince çizgili su ısıtmalı cerrahi yatak	E-Z Sistemleri	EZ-211	Ameliyat sırasında ısı kaybı ve hipotermiyi önler
Veteriner merhemi	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron %5, Augensalbe	Göz kuruluğunu önlemek için göz merhemi