Farelerde Acinetobacter baumannii enfekteli yanık yaralarının biyolüminesans görüntülemesi

Özet

Kaynak: Wang, Y. ve diğerleri. In Vivo'da Çoklu ilaç dirençli Acinetobacter baumannii yanık enfeksiyonlarında biyolüminesans görüntüleme kullanılarak antimikrobiyal mavi ışık tedavisinin araştırılması. J. Vis. Exp. (2017)

Bu video, biyolüminesans operon taşıyan Acinetobacter baumannii aşılanmış farelerde yanık yarası enfeksiyonlarının görüntülenme prosedürünü göstermektedir. Lusiferaz katalizli alt oksidasyonun, bakteriyel yüke orantılı ışık üretmesini ve enfeksiyonun ilerlemesinin biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak gerçek zamanlı izlenmesini mümkün kıldığını göstermektedir.

Protokol

Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.

1. Farelerde Enfeksiyonların Biyolüminesans Görüntülemesi

1. Fareleri, yoğun yüklü bir cihaz kamerası, bir kamera kontrolörü, örnek odası ve görüntü işlemcisi içeren düşük ışıklı görüntüleme sistemi kullanarak görüntüleyin.
2. Fareleri, ketamin-ksilazin kokteyli (100 mg/kg - 20 mg/kg) intraperitoneal enjeksiyonla anestezi edin. Farelerin palpebralına pamuklu çubukla hafifçe dokunun; Palpebral refleksin olmaması, uygun bir anestezik derinliğini gösterir.
3. Canlı görüntüleme yazılımını başlatın. Görünen kontrol panelinde Başlat'a tıklayın. Sıcaklık kutusunun rengi yeşile dönene kadar bekleyin; bu da numune odasındaki aşamanın sıcaklığının 37 °C'ye ulaştığını gösterir.
4. Fareleri, görüntüleme sisteminin örnek odasındaki sahneye (37 °C) yerleştirin, enfekte yanıklar ise doğrudan kameranın altına yerleştirilir.
   NOT: Yanıklar kuruduğunda bakterinin biyolüminesansı azalabilir. Bu nedenle, fare yanıklarının görüntülemeden önce PBS ile nemlendirilmesi önerilir.
5. Kontrol panelinde, "Luminescence" yerine bir işaret koyun. "Otomatik pozlama" seçeneğini seçin, böylece görüntüleme süresi biyolüminesans yoğunluğuna göre canlı görüntüleme yazılımı tarafından optimize edilecektir.
6. "Görüş Alanı" açılır menüsünden "C" seçin. Yazılımın odak mesafesini belirlemesi için "Orta Aralık Tarama" seçeneğini seçin. Overlay'in yanına bir işaret koy.
7. Görüntüyü yakalamak için "Acquire" seçeneğine tıklayın. "Image Label'ı Düzenle" kutusunda "OK;" seçeneğine tıklayarak "Image Window" ve "Toll Palette" görünecektir.
8. Otomatik seçim için Otomatik ROI parametrelerini ayarlayın.
9. Biyolüminesans yoğunluğunu göreceli parınç birimleri (RLU) olarak niceli olarak ölçün ve biyolüminesansı pembeden (en yoğun) maviye (en az yoğun) arasında sahte bir renk ölçeğinde gösterin.
10. Fare yanıklarında bakterilerin hayatta kalma oranını, biyolüminesans yoğunluk analizine dayanarak farklı zaman noktalarında hesaplayın. Bakterilerin belirli bir zaman noktasındaki hayatta kalma oranı = o zaman noktasında ölçülen biyolüminesans yoğunluğu / antimikrobiyal mavi ışığa maruz kalmadan hemen önce ölçülen biyolüminesans yoğunluğu.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Serisi III	Preklinik in vivo görüntüleme
Işık yayan diyot LED	VieLight Inc, Toronto, Kanada	415 nm	Aydınlatma için ışık kaynağı
Fare	Charles River Laboratuvarları, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 haftalık, 17-19 g ağırlık
Acinetobacter baumannii	Brooke Ordu Tıp Merkezi, Fort Sam Houston, TX	Klinik izolat	Mühendislik edilmiş parıltı gerilim
Greiner yemekleri	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm