Ağızdan Patogenezi İnceleme İçin Bakteriyel-Mantar Çapraz Biyofilmlerin Oluşturulması

Özet

Kaynak: Schlafer, S ve Frost Kristensen, M. Konfokal Mikroskopi kullanarak Çapraz Krallık Biyofilmlerinde Hücre Dışı PH'ın İzlenmesi. J. Vis. Exp. (2020)

Bu video, Streptococcus mutans ve Candida albicans'ın ağız benzeri koşullarda biyofilmler çapraz yetiştirilişini göstererek bakteriyel-mantar etkileşimlerini modellemekte; böylece mikrobiyal sinerji, glukan aracılı yapışma ve ağızdan patogenezde asidijenik virülans incelenmesini mümkün kılar.

Protokol

Örnek toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Krallıklar arası biyofilmlerin yetiştirilmesi

1. Streptococcus mutans (S. mutans) DSM 20523 ve Candida albicans (C. albicans) NCPF 3179 kan agar plakalarında aerobik koşullarda 37 °C sıcaklıkta yetiştirilebilir.
2. Her organizmadan tek koloni 5 mL beyin kalp infüzyonu (BHI) ile doldurulmuş test tüplerine aktarın. Aerobik koşullarda 37 °C'de 18 saat boyunca yetiştirin.
3. Gece kültürlerini 1.200 x g ile 5 dakika boyunca santrifüjleyin. Üst yüzeyi atın, hücreleri fizyolojik tuzlu suyla tekrar askıya alın ve C. albicans (~10⁷

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kan agar plakaları	Statens Serum Enstitüsü	677
Beyin kalp infüzyonu	Oksoid	CM1135
Beyin kalp infüzyonu + %5 sukroz	BDH laboratuvar malzemeleri	10274
Candida albicans	Ulusal Patojenik Mantarlar Koleksiyonu	NCPF 3179
Fetal sığır serumu	Gibco Life teknolojileri	10270
GS-6R soğutmalı santrifüj	Beckman	Yok
μ-Plaka 96 Siyah	İbidi	89626
Steril fizyolojik salin	VWR	6404
Streptococcus mutans	Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen	DSM 20523
V-spektrofotometre V-3000PC	VWR	Yok