Bakterilerde Morfolojik Değişikliklerin Canlı Hücre Floresan Mikroskopisi Kullanılarak Görüntülenmesi

Abstract

Kaynak: Brzozowski, R. S. ve diğerleri. Bakterilerde subhücre protein lokalizasyonunu ve hücre morfolojisindeki değişiklikleri araştırmak için canlı hücre floresan mikroskobi. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, bakterilerde gerçek zamanlı morfolojik değişiklikleri görselleştirmek için canlı hücre floresans mikroskopisini göstermektedir. Yüksek çözünürlüklü görüntüleri gerçek zamanlı elde etmek için görüntüleme, zaman geçişi ve dekonvolüsyonda kullanılan adımları özetler.

Protocol

1. Görüntüleme

1. Deney günü, mikroskop sistemini açın. Görüntüleme yazılımını başlatın ( bkz. Materyaller Tablosu) masaüstündeki uygun simgeye tıklayarak. Yazılımın başlangıç diyalog kutusundaki Başlangıllaştır seçeneğine (üzerinde mikroskop gösterilmiştir) tıklayarak mikroskobu başlatın. Başlatmadan önce mikroskop kaba ayarıyla objektİFin tamamen aşağı indirildiğinden emin olun.
   NOT: Başlatmadan sonra, başlatma menüsüne ek olarak üç ek diyalog kutusu görünmelidir: resolve3D, veri toplama ve filtre monitörü.
2. Üretici tarafından sağlanan 100x yağ batdırma hedefine 1.517 (kırılma indeksi) bir damla yağ ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	Fisher Biyoreaktifleri	BP160-100	Moleküler Biyoloji Derecesi - Düşük EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Mikroskopi
Cam taban çanak	MatTek	P35G-1.5-14-C	Mikroskopi
Mikroskop	GE	DeltaVision Elite	Özelleştirilmiş Olympus IX-71 Ters Mikroskop Standı; Özel Aydınlatma Kulesi ve Iletim Işık Aydınlatma Modülü. Hedefler: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X YAĞ (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); 100X Objective için DIC Prism Nomarski; CoolSnap HQ2 kamera; SSI Meclisi 7 renk; Çevresel kontrol odası - opak bir halde.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	FtsZ inhibitörü
SoftWorx	GE		Üretici tarafından sağlanan görüntüleme yazılımı