Zenginleştirilmiş Sinek Örneklerinden Gıda Kaynaklı Patojenlerin PCR Tabanlı Tespiti

Özet

Kaynak: Pava-Ripoll ve diğerleri. Bireysel pislik sineklerinden gıda kaynaklı bakteriyel patojenlerin tespiti. J. Vis. Exp. (2015)

Bu video, patojenlere özgü tabletler kullanarak zenginleştirilmiş sinek örneklerinden hedef bakteriyel DNA'yı amplit eden PCR tabanlı bir yöntemi gösteriyor; bu yöntem, bireysel böceklerde gıda kaynaklı patojenlerin varlığını doğrulamak için gerçek zamanlı floresans tespiti ve erime eğrisi analizini mümkün kılar.

Protokol

1. Hidratlı PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) hazır tabletler

1. Soğutucu (4 °C) PCR soğutma bloğu seçin ve insertin üzerine PCR tüplü raf yerleştirin.
2. Hedef gıda kaynaklı patojenin PCR-hazır tabletlerini (her kitle birlikte) içeren PCR tüplerini, raf dosyasına göre tutucuya yerleştirin.
3. Dekap aletini kullanarak PCR tüplerinin kapaklarını dikkatlice çıkarın. Kapakları atın ve her tüpün bir tablet içerdiğinden emin olun.
4. Salmonella ve Cronobacter için 50 μl veya L. monocytogenes için 30 μl lizat belirli PCR tüplerine aktarın. Yeni optik kapaklar kullanın ve kapatma aracıyla PCR tüplerine sıkıca sabitleyin.
   NOT: Liza....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kaplama aracı	DuPont	D11677028
Kapak açma aracı	DuPont	D11134095
PCR tüplü raf/tutucu	DuPont	D12701663
İnce uç, düz uçlu pensler	BioQuip	4731	Kullanmadan önce sterilize edin. Birden fazla tedarikçi.
Soğutma bloğu			Birden fazla tedarikçi.
Santrifüj			Birden fazla tedarikçi.