Bu video, hastadan kaynaklı kistik fibroz balgamının bakteriyel biyofilm oluşumunu nasıl etkilediğini değerlendirmek için in vitro bir yöntemi göstermektedir. Oda slaytları, floresan boyama ve konfokal mikroskopi kullanılarak, balgamla yetiştirilen biyofilmlerde kalınlığın arttığını, mimarinin değiştiğini ve daha yüksek canlı biyokütleyi ortaya koyarak ana bileşenlerin biyofilm gelişiminin şekillenmesindeki rolünü ortaya koymaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kistik Fibroz Hastalarından Balgam Filtratları Tarafından İndüklenen Bakteriyel Biyofilmlerin Konfokal Görüntülemesi
213 görüntülenme
⸱
26 Şubat 2026
Bu makalede
Özet
Protokol
Örnek toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
Boyama Biyofilmleri ve Konfokal Mikroskopi
- İstenilen büyüme süresine (24-48 saat en iyi şekilde karşılık verir) takip edin, oda kuyulardan medya maddelerini çıkarın ve her odayı 300 μl steril PBS ile iki kez nazikçe yıkayın.
- Biyofilm için boyama karışımını hazırlayın; ihtiyaç duyulan her ml çözelti için her boydan (canlılık kitinde sağlanan) 1 μl karıştırın. Su veya ortam çözeltisi ile boya yapın.
NOT: Üretici su önerir.
- Her bir kutuya 200 μl boya karışımı ekleyin ve oda sıcaklığında, karanlıkta 45 dakika kuluçka yapın.
- Bölmelerden leke karışımını çıkarın ve her kuyuyu 300 μl steril PBS ile yıkayın. PBS'yi çıkarın ve yerine temiz su veya ortam ile değiştirin.
- Biyofilmlerin konfokal mikroskopi ile görselleştirilmesine devam edin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Lab-Tek II Odalı kaplama camı, #1.5 borosilikat, 8 kuyu | Thermo Sicher Scientific | 155409 | |
| Filmtracer Canlı/Ölü Biyofilm Yaşam Kiti | Thermo Fisher Scientific | L10316 | |
| Millers LB Suyu | Thermo Fisher Scientific | 12780-052 | Gecede gowth/biyofilm büyümesi için standart medya |
| Fosfat tamponlu tuzlu (Dulbecco A) | Oksoid | BR0014G | Medya çıkardıktan sonra biyofilm odalarının yıkanması |
| Zeiss AxioVert 200M | Carl Zeiss |
