Arabidopsis thaliana köklerinin topraksız bir sistemde bakteriyel kolonizasyonunun izlenmesi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Harris, S. L. ve diğerleri. Arabidopsis thaliana köklerinde bakteriyel kolonizasyonun ve bakımının izlenmesi, yüzen hidroponik sistemde. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, topraksız bir sistemde yetiştirilen Arabidopsis thaliana fidelerinde kökle ilişkili bakterilerin kolonileşmesini izlemek için bir protokolü göstermektedir. Kolonizasyondan sonra, bakteriler sonikasyon ile yerinden çıkarılır, ardından seyreltir, kaplama ve inkübe edilip bakteriyel bağlanma ve canlılığı yansıtan koloniler oluşturulur.

Protokol

Canlı hücre sayımları için bakteri toplama

NOT: Fide kökü başına bakteri sayısı, herhangi bir kuluçka zamanında belirlenebilir. Kolonizasyon 0 saat ile 18 saat arasında izlenebilirken, bakım 18 saat sonrasında izlenebilir.

Fideleri ağdan çıkarın (Şekil 1, adım 5). Alevle sterilize edilmiş forsepsleri yaprakların altına nazikçe yerleştirin (ama yaprak tarafında) ve sapı hafifçe sıkın. Fideleri ağdan yukarı ve uzaklaştırarak kökü kırmadan çıkarın. Kök kırılırsa, ağ tabanı nazikçe kazıyarak tam uzunluğu toplayın.
Bitki köklerinden bakterileri uzaklaştırın. Bakterileri, 1 mL ddH₂₀içeren 24 kuyu bir plakanın kuyularına aktarın. Örnekleri sonikle yapın.
Köklerdeki bakterileri ölç.
1. Soniklenmiş örneklerin ardı olarak 10 kat seyreltilmesi ile bakteriyel büyüme ortamında ^10-6 seyreltme ile gerçekleştirilir. Her seyreltmeden 50 μL ayrı agar plakalarına ekleyin ve steril cam boncuklarla yayılır. Plakaları bakteriler için optimal sıcaklıkta kuluçka yapın, ta ki bireysel kolonileri sayılabilene kadar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1: A. thaliana köklerinde bakteriyel kolonizasyon ve bakım testleri. A. thaliana fideleri, sterilize edilmiş plastik ağ üzerinde yetiştirilmiş, bakteriler için optimize edilmiş bir büyüme ortamına aktarılmıştır [burada, 0.1 ...