Büyüme Düzenleyici Proteinlerin Görüntülemesi İçin Fotobeyazlama Siyanobakteriyel Pigmentler

Özet

Kaynak: Zhan, Y. ve diğerleri. Foto ağartma, Cyanobacterium Prochlorococcus'taki ftsZ halkasının süper çözünürlüklü görüntülenmesini sağlar. J. Vis. Exp. (2018).

Bu video, büyüme düzenleyici proteinlerin floresans görüntülemesini iyileştirmek için soğuk koşullarda ksenon ışığı kullanılarak siyanobakteriyel hücrelerde pigmentlerin fotobeyazlaştırma prosedürünü göstermektedir.

Protokol

1. Klorofil pigmentlerinin blokaj aşamasında fotobeyazlaştırılması

1. Kapak kapını boyama kabına aktarın. Kaplamanın üstüne %0,2 (v/v) non-ionik deterjan-100 ve %3 (v/v) keçi serumu içeren 50 μL bloklayıcı tampon ekleyin.
2. Tüm boyama plakasını buzun üzerine koyup ksenon ışık kaynağının altına en az 60 dakika boyunca foto ağartma için taşıyor; ışık yoğunluğu 1.800 μmol/m²·s ile yapılabilir.
3. Foto ağartma ve bloklamadan sonra, bloklayıcı tamponu dikkatlice bir kağıt havlunun kenarıyla emerek çıkarın.
   NOT: Xenon ışığın yoğunluğu o kadar yüksektir ki, göz koruması için uygun güneş gözlüğü gereklidir. Bu arada, ışık sızıntısını önlemek için ışık kaynağını ve plakayı alüminyum folyo ile sarın, bu da göz hasarına yol açabilir. Kapak örtüsünü her 15 dakikada bir kontrol edin ve nemli kaldığından emin olun. Kuruysa, 50 μL bloklayıcı tampon ekleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Polistirol parçacıkları	Spherotech	PP-20-10	2.0-2.4 μm
Kapak Kayışı	Marienfeld	111580	18 mm ∅, Kalınlık No. 1
Etanol	Scharlau	ET00021000
Poli-L-lizin hidrobromid	Sigma-Aldrich	P9155	mol ağırlık 70.000-150.000
Paraformaldehit	Sigma-Aldrich	158127
Glutaraldehit çözeltisi, %50	Sigma-Aldrich	340855
PBS	Sigma	P3813
Triton X-100	Sigma	T8787
EDTA Disodyum Tuz, 2-hidrat	Altın biyoteknolojisi	E-210-500
Trizma üssü	Sigma	T1503
Lizozim	Sigma	L6876
Keçi serumu	Sigma	G9023
XD-300 Xenon ışık kaynağı			250 W