Uyarılı Raman Saçılma Mikroskobu Kullanılarak Bakteriyel Antibiyotik Duyarlılığının Tespiti

Özet

Kaynak: Zhang, M. ve ark., Tek bir bakteride deuteryum dahil edilmesinin uyarılmış raman saçma görüntülemesi ile hızlı antimikrobiyal duyarlılık testi. J. Vis. Exp. (2022)

Bu video, sömürücü etiketli metabolik aktiviteyi takip ederek antibiyotiklere karşı hassasiyeti değerlendirmek için uyarılmış Raman saçılma mikroskobunun uygulanmasını göstermektedir. Karbon–döteryum sinyallerini izleyerek yöntem, dirençli ve hassas bakteri popülasyonlarının hızlı tespitini sağlar.

Protokol

1. D₂O Antibiyotik varlığında dahil edilen tedavi (Şekil 1a)

1. Bakteri konsantrasyonunu, 600 nm dalga boyunda bir fotometre ile optik yoğunluğu (OD) ölçerek kontrol edin.
2. Bakteriyel çözeltiyi normal Mueller-Hinton suyu (MHB) ortamı kullanılarak seyreltirin; bu ortam süsü içermeyen ve nihai hücre konsantrasyonu 8 x 10⁵ CFU/mL elde edilir. Bakteri hücrelerini karıştırmak için nazikçe vortex yapın.
3. Yedi adet 1,5 mL mikro tüpte bakteriyel çözeltinin 300 μL alikotu, bir 1,5 mL'lik mikro tüpte ise 600 μL aliquot bakteriyel çözeltiyi hazırlanın.
4. Mikro tüpte 600 μL bakteriyel çözelti içeren 4,8 μL antibiyotik....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Akusto-optik modülasyon	Gooch&Housego	R15180-1.06-LTD	Modüle Stokes lazer ışını
Amoksisilin	Sigma Aldrich	A8523-5G
Bant geçişli filtre	Chroma	HQ825/150m	Stokes lazer ışınını fotodiyoddan önce engelle
Kalsiyum klorür	Sigma Aldrich	C1016-100G	Katyon ayarı
Katyonla ayarlanmış Mueller-Hinton suyu	Fisher Scientific	B12322	Mikroorganizmaların sulandırılma yöntemleriyle antimikrobiyal duyarlılık testi
Santrifüj	Termo Bilimsel	75002542
Kapak gözlükleri	VWR	16004-318
Çıtlık kapaklı kültür tüpü	Fisher markası	149569B
Döteryum oksit		151882	Antibiyotikleri çözündürmek için organik çözücü
Döteryum oksit-d6	Sigma Aldrich	156914	SRS görüntüleme sistemini kalibre etmek için standart olarak organik çözücü
Escherichia coli BW 25113	Coli Genetik Stok Merkezi	7636
Eppendorf polipropilen mikrosantrifüj tüpleri 1.5 mL	Fisher markası	05-408-129
Gentamisin sülfat	Sigma Aldrich	G4918
Hidrofilik Poliviniliden Florür Filtreler	Millipore-Sigma	SLSV025NB	Gözenek boyutu 5 μm
InSight DeepSee femtosaniye darbeli lazer	Spektrum-Fizik	Model: insight X3	SRS görüntüleme için 1045 nm'de ayarlanabilir lazer kaynağı ve sabit lazer kaynağı
Kilitli amplifikatör	Zürih Enstrümanı	HF2LI	SRS sinyallerini demodüle et
Yağ kondansatörü	Olympus	U-AAC	NA 1.4
Pseudomonas aeruginosa ATCC 47085 (PAO1)	Amerikan Tip Kültürü Koleksiyonu	ATCC 47085
Fotodiyot	Hamamatsu	S3994-01	Dedektör
Polipropilen konik tüp 15 mL	Falcon	14-959-53A
Polipropilen filtreler	Termo Bilimsel	726-2520	Gözenek boyutu 0.2 μm
Steril petri kapları	Corning	07-202-031
Şırınga 10 mL	Fisher markası	14955459
UV/Vis Spektrofotometresi	Beckman Coulter	Model: DU 530	600 nm dalga boyunda optik yoğunluğun ölçülmesi
Vortex mikser	VWR	97043-562
Su hedefi	Olympus	UPLANAPO/IR	60×, NA 1.2