Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun kurulması

Özet

Kaynak: Hiroyasu, A., D ve diğerleri, Drosophila melanogaster larvalarından hemositlerin çıkarılması ve mikrobiyal enfeksiyon ve analizi. J. Vis. Exp. (2018)

Bu video, Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun oluşturulması için bir mikrobakteri damlasına yerleştirilip tungsten iğneyle delinerek uygulanır. Larvalar, daha sonra oluklu, besin açısından zengin bir agar plakasında kuluçka edilip konakçı-patojen etkileşimleri incelenir.

Protokol

1. In vivo enfeksiyon

1. Drosophila meyve suyu agar tabağını oda sıcaklığında 15 dakika ısıtın.
   1. 700 mL suya 30 g agar ekleyin ve 40 dakika otoklavlayın.
   2. 0,5 g metil parabeni 10 mL mutlak etanolde çöz.
   3. Metil paraben çözeltisini 300 mL meyve suyu konsantresine ekleyin.
   4. Meyve suyu konsantresini otoklavlanmış agar çözeltisine hızla karıştırın ve 5 mL'yi 10 × 35 mm Petri kabına dağıtın.
   5. Tabaklar 15 dakika soğuduktan sonra 4 °C'de saklayın.
2. Üçüncü instar larvaları hazırlayın.
3. Maya hamurunu bir agar tabağa koyun. Larvaların kurumayı önlemek için göç edebileceği agar p....

Sonuçlar

Şekil 1: In vivo enfeksiyon. A) Drosophila meyve suyu, agar plakaları ve maya macunu in vivo enfekte larvaların kuluçkasında kullanılır. Agar plakasında larva uzun ömürlülüğünü sağlamak için kesikler yapılır (gr.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Stereo mikroskop	Amscope	SM-1BSZ-L6W
Forseps	VWR	82027-402
Coxiella burnetii - mKiraz	Dr. Heinzen, R.
Drosophila meyve suyu tabakları	Cold Spring Harbor Protokolleri		http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/9/pdb.rec11113.full
Agar	Fisher Biyoreagentleri	BP1423-500
Metil paraben	Amresco	0572-500G
Mutlak etanol	Fisher Biyoreagentleri	BP2818-500
Welch'in %100 Üzüm suyu dondurulmuş konsantresi, 340 mL	Amazon	B0025UJVGM
Petri kabları, 10 x 35 mm	Fisher Scientific	08-757-100A
Maya, Fırıncılar Kurutulmuş Aktif	MP Biyomedikal	210140001	1 parça maya (v/v) içine 2 parça su ekleyin
Volfram iğne	Güzel Bilim Araçları	10130-20
Tutma forsepsi	VWR	HS8313
Listeria monocytogenes	ATCC	Strain: 10403S	Listeria monocytogenes süzü 10403S (Bishop ve Hinrichs, 1987), 30 °C'de 50 μg/ml streptomisin içeren Difco Beyin-kalp infüzyonu (BHI) çorbasında (BD Biosciences) yetiştirildi.